[發明專利]從玉米漿中提取生物素的方法及其薄層層析掃描檢測方法

有效

• 申請號: 201410187254.9
• 申請日: 2014-05-06
• 公開（公告）號: CN103926368A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 馮木香;劉代成
• 申請（專利權）人: 山東師范大學
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N1/28;C07D495/04
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 彭成

1.一種從玉米漿中提取生物素的方法，其特征在于：步驟如下：

(1)取玉米漿，加入1～2倍的N,N-二甲基甲酰胺，加熱提取，提取溫度為75℃～85℃，提取時間為1～2h，提取后過濾，得提取液和濾渣；用無水乙醇洗滌濾渣3～5次，過濾，合并濾液得乙醇洗滌液，每次無水乙醇的用量與玉米漿的體積相等；將提取液和乙醇洗滌液合并，過濾，濾液蒸發濃縮至玉米漿體積的8/10～6/10，得濃縮液；

(2)向步驟(1)所得濃縮液中加入3倍的無水乙醇，靜置，過濾除去沉淀，濾液蒸發濃縮至玉米漿體積的4/10～3/10，得濃縮液；

(3)向步驟(2)所得濃縮液中加入4～5倍的丙酮，靜置，過濾除去沉淀，濾液蒸發濃縮至玉米漿體積的2/10，得濃縮液；

(4)向步驟(3)所得濃縮液中加入3～4倍的丙酮，靜置，過濾除去沉淀，蒸發濃縮至玉米漿體積的1/20，得濃縮液；

(5)步驟(4)所得濃縮液中加入乙酸丁酯和環己烷，乙酸丁酯、環己烷的加入量與濃縮液的體積相同，靜置分層；取上清液，即為生物素溶液。

2.根據權利要求1所述的從玉米漿中提取生物素的方法，其特征在于：所述蒸發濃縮的溫度為40～60℃。

3.一種生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：步驟如下：

(1)取待檢測樣品液，點在硅膠板上，加入展開劑，在展開缸內展開，然后將薄層板拿出放在通風柜中晾干；同時，采用外標一點法點不同濃度的生物素標準品溶液，同時展開；

所述展開劑為二氯甲烷-氯仿-甲醇-冰乙酸混合液，其中，二氯甲烷、氯仿、甲醇、冰乙酸四者的體積比為3:3:2:0.06；

(2)將2,4-二甲氨基肉桂醛、硫酸和無水乙醇混合，配成染色液，其中2,4-二甲氨基肉桂醛終濃度為0.1～0.2％，硫酸終濃度為1～2％；展完后晾干的展板，用染色液噴霧染色，得到與背景對比明顯的標準品的斑點和樣品的斑點；

(3)利用薄層掃描儀以530nm吸收波長進行薄層層析掃描，照射燈為鎢燈，檢測計算得到生物素標準品溶液質量和峰面積積分值的關系的回歸方程，然后根據樣品液的峰面積積分值計算出樣品液中生物素的質量濃度。

4.根據權利要求3所述的生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：所述生物素標準品溶液包括濃度分別為0.05μg/μl，0.2μg/μl，0.25μg/μl，0.3μg/μl，0.4μg/μl的一系列標準品溶液。

5.根據權利要求3所述的生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：所述回歸方程Y＝65.2335+2.6355X，r＝0.99931,RSD＝1.88％。

6.根據權利要求3所述的生物素的薄層層析掃描檢測方法，其特征在于：所述樣品液是通過以下方法制備得到的：(1)取玉米漿，加入1～2倍的N,N-二甲基甲酰胺，加熱提取，提取溫度為75℃～85℃，提取時間為1～2h，提取后過濾，得提取液和濾渣；用無水乙醇洗滌濾渣3～5次，過濾，合并濾液得乙醇洗滌液，每次無水乙醇的用量與玉米漿的體積相等；將提取液和乙醇洗滌液合并，過濾，濾液蒸發濃縮至玉米漿體積的8/10～6/10，得濃縮液；

(2)向步驟(1)所得濃縮液中加入3倍的無水乙醇，靜置，過濾除去沉淀，濾液蒸發濃縮至玉米漿體積的4/10～3/10，得濃縮液；

(3)向步驟(2)所得濃縮液中加入4～5倍的丙酮，靜置，過濾除去沉淀，濾液蒸發濃縮至玉米漿體積的2/10，得濃縮液；

(4)向步驟(3)所得濃縮液中加入3～4倍的丙酮，靜置，過濾除去沉淀，蒸發濃縮至玉米漿體積的1/20，得濃縮液；

(5)步驟(4)所得濃縮液中加入乙酸丁酯和環己烷，乙酸丁酯、環己烷的加入量與濃縮液的體積相同，靜置分層；取上清液，即為樣品液。