[發明專利]一種毛蚶多糖的鑒別方法

有效

• 申請號: 201410186537.1
• 申請日: 2014-05-06
• 公開（公告）號: CN103954718A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 盧寧;王麗;牛鳳菊;張晶;許翠萍
• 申請（專利權）人: 濟南康眾醫藥科技開發有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于使用凝膠高效液相色譜法，具體步驟如下：

色譜條件及系統適應性：用親水球形高聚物為填充劑的凝膠色譜柱；以0.05-0.15mol/L的硫酸鈉溶液為流動相；示差折光檢測器；柱溫：30℃-45℃；流速：0.5ml-1?ml?/min；理論板數按葡萄糖峰計算應不低于3000；

制備毛蚶多糖：取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約0.5-5g的樣品，加10-20倍的石油醚：乙醇=1：0.5-2的溶液，于30℃-50℃水浴保溫1-3hr，超聲提取15-45min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水10-30ml，用氫氧化鈉溶液調pH至6.5～8.5，70℃-90℃水浴0.5-4hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水5-50ml，繼續水浴攪拌0.5-2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加1-4倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水5-50ml?，70℃-90℃水浴2hr，離心，取上清液；加1/4-1/2體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入2-5倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80℃以下減壓干燥，制得毛蚶多糖；

制備毛蚶多糖供試品溶液：取毛蚶多糖，加流動相使溶解，制成每1ml含2-25mg的溶液，即得；

測定：取毛蚶多糖供試品溶液10-100μl，注入液相色譜儀，測定；

多糖圖毛蚶譜中呈現2個特征峰，以圖譜中的S峰為參照，計算2特征峰與S峰的相對保留時間：峰1為0.56±10%、峰2為0.68±10%、峰S?為1。

2.根據權利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于色譜條件及系統適應性：用親水球形高聚物為填充劑的凝膠色譜柱；以0.1mol/L的硫酸鈉溶液為流動相；示差折光檢測器；柱溫：40℃；流速：0.5ml?/min；理論板數按葡萄糖峰計算應不低于5000。

3.根據權利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于制備毛蚶多糖為：取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約1-3g的樣品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1-1.5的溶液，于35℃-45℃水浴保溫2-3hr，超聲提取20-40min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水15-25ml，用氫氧化鈉溶液調pH至7～8，80℃水浴1-3hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水10-40ml，繼續水浴1-2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加2-3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水15-25ml?，80℃水浴2hr，離心，取上清液；加1/4-1/2體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入3-4倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80℃以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。

4.根據權利要求1或權利要求3的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于制備毛蚶多糖為：取毛蚶制劑研細，稱取含毛蚶提取物約2g的樣品，加15倍的石油醚：乙醇=1：1的溶液，于40℃水浴保溫3hr，超聲提取30min，脫脂棉過濾，取濾渣，揮干；加去離子水20ml，用氫氧化鈉溶液調pH至7.5～8，80℃水浴3hr，時時攪拌，過濾，濾液另器保存，濾渣加去離子水20ml，繼續水浴2hr，時時攪拌，過濾，濾液合并，加3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心，沉淀加去離子水20ml?，80℃水浴2hr，離心，取上清液；加1/4體積的氯仿:正丁醇=4:1的溶液，劇烈振搖，離心，取上層液體，重復操作多次，至液面中間蛋白層完全消失，取上層液體，加入3倍量乙醇沉淀6hr以上，棄上清液，下層液離心離心，取沉淀，80℃以下減壓干燥，制得毛蚶多糖。

5.根據權利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于制備毛蚶多糖供試品溶液為：取毛蚶多糖，加流動相使溶解，制成每1ml含10mg的溶液，即得。

6.根據權利要求1的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于取毛蚶多糖供試品溶液10-50μl，注入液相色譜儀，測定。

7.根據權利要求1或權利要求6的一種毛蚶多糖的鑒別方法，其特征在于取毛蚶多糖供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定。