[發(fā)明專利]用于生物催化黃酮類化合物葡萄糖苷化的基因工程菌

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410185256.4
• 申請(qǐng)日: 2014-05-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105087454B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王偉;吳松;楊燕;童元峰;王慧敏;林霖;唐亮;陳成娟;劉忞之;程克棣;孔建強(qiáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12P19/60;C12P19/58;C12P19/44;C12R1/19
• 代理公司: 北京三高永信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11138
• 代理人: 滕一斌

1.一種基因工程菌，其特征在于：在大腸桿菌內(nèi)共表達(dá)編碼磷酸葡萄糖變位酶、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶和尿苷二磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)移酶的基因，所述的大腸桿菌為生物保藏編號(hào)為CGMCC No.8818菌種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的編碼磷酸葡萄糖變位酶、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶和尿苷二磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)移酶的基因表達(dá)使用組成型啟動(dòng)子或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子啟動(dòng)其高表達(dá)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，其中所述的編碼磷酸葡萄糖變位酶、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶和尿苷二磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)移酶的基因通過(guò)整合型或質(zhì)粒型載體高表達(dá)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，其中所述的磷酸葡萄糖變位酶基因是如SEQ ID NO:1所表示的堿基序列組成的多核苷酸。

5.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，其中所述的磷酸葡萄糖變位酶是如SEQID NO:2所表示的氨基酸殘基序列組成的蛋白質(zhì)。

6.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的磷酸葡萄糖變位酶具有催化葡萄糖-6-磷酸轉(zhuǎn)變成葡萄糖-1-磷酸的酶活性。

7.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因是如SEQ ID NO:3所表示的堿基序列組成的多核苷酸。

8.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶是如SEQ ID NO:4所表示的氨基酸殘基序列組成的蛋白質(zhì)。

9.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶具有催化葡萄糖-1-磷酸和三磷酸尿苷形成尿苷二磷酸葡萄糖的酶活性。

10.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的尿苷二磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)移酶的特征在于：

⑴SEQ ID NO:5所示的氨基酸殘基序列。

11.根據(jù)權(quán)利要求1的基因工程菌，其特征在于，所述的尿苷二磷酸葡萄糖轉(zhuǎn)移酶基因是如SEQ ID NO:6所示的堿基序列組成的多核苷酸。

12.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的基因工程菌的在生物催化如下底物中的形成相應(yīng)的葡萄糖苷的應(yīng)用，所述的底物選自⑴黃酮底物；⑵黃酮醇底物；⑶異黃酮底物；⑷二氫黃酮底物。

13.根據(jù)權(quán)利要求12的應(yīng)用，其特征在于，

⑴所述的黃酮底物選自黃芩素、野黃芩素、漢黃芩素、木蝴蝶素A、5,7–二羥基黃酮、3',4',5,7–四羥基黃酮、4',5,7–三羥基黃酮；

⑵所述的黃酮醇底物選自槲皮素、山奈酚；

⑶所述的異黃酮底物選自5,7–二羥基黃酮–4'–甲氧基異黃酮、3',4',7–三羥基異黃酮、染料木素、大豆黃酮；

⑷所述的二氫黃酮底物選自柚皮素。

14.根據(jù)權(quán)利要求12-13中任一項(xiàng)的應(yīng)用，其特征在于，所述的應(yīng)用是利用活細(xì)胞作為生物催化劑，直接生物催化或生物合成黃酮類化合物形成黃酮-O-葡萄糖苷。