[發(fā)明專利]一種利用亞銨法紙漿為原料制備微生物油脂的方法

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• 申請日: 2014-05-04
• 公開（公告）號: CN105087687A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈宏偉;謝海波;趙宗保
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院大連化學(xué)物理研究所
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12R1/645
• 代理公司: 沈陽科苑專利商標代理有限公司 21002
• 代理人: 馬馳

1.一種利用亞銨法紙漿為原料制備微生物油脂的方法，其特征在于：以天然木質(zhì)纖維素經(jīng)亞硫酸銨制漿法處理后的紙漿為原料生產(chǎn)微生物油脂；

一、1)、先酶解后發(fā)酵：

a、紙漿酶解：木質(zhì)纖維素經(jīng)亞硫酸銨預(yù)處理后獲得紙漿酶解條件為：酶解時紙漿漿液固形物含量為5-30％(w/v)，纖維素酶用量為5-30FPU/g(干紙漿)，木聚糖酶用量為0.1-10mg/g(干紙漿)；酶解條件為：pH3.5-7，溫度30-60℃，糖化時間12-72h；FPU為纖維素濾紙酶活；

b、調(diào)整酶解水解液中總還原糖濃度在30-150g/L，發(fā)酵前在其中加入至終濃度：酵母粉0.1-2g/L，硫酸銨0.5-5g/L，磷酸二氫鉀0.1-1g/L,七水硫酸鎂0.5-3g/L，滅菌后接入0.1-5g/L產(chǎn)油微生物，在溫度25-35℃，pH4.5-6，溶氧10-90％條件下進行批式發(fā)酵，獲得含油菌體；

或、調(diào)整酶解水解液中總還原糖的濃度在30-300g/L，在其中加入至終濃度：酵母粉0.1-10g/L，硫酸銨0.5-10g/L，磷酸二氫鉀0.1-10g/L,七水硫酸鎂0.5-10g/L，滅菌后接入0.1-5g/L產(chǎn)油微生物，在溫度25-35℃，pH4.5-6，溶氧10-90％條件下進行連續(xù)培養(yǎng)，控制稀釋率為0.01-0.12h^-1，獲得含油菌體；

或、調(diào)整酶解水解液中總還原糖的濃度在30-300g/L，在其中加入至終濃度：酵母粉0.1-10g/L，硫酸銨0.5-10g/L，磷酸二氫鉀0.1-10g/L,七水硫酸鎂0.5-10g/L，滅菌后接入0.1-5g/L產(chǎn)油微生物，在溫度25-35℃，pH4.5-6，溶氧大于10-90％條件下進行批式培養(yǎng)，培養(yǎng)到對數(shù)生長期后期進行補料，補加含總還原糖150-300g/L水解液進行批式補料發(fā)酵，獲得含油菌體；

或者2)同步糖化發(fā)酵：用水將紙漿調(diào)整到固液比為3％-30％(w/v)，加入至終濃度：酵母粉0.1-2g/L，硫酸銨0.5-5g/L，磷酸二氫鉀0.1-1g/L,七水硫酸鎂0.5-3g/L，滅菌后加入纖維素酶5-20FPU/g(干紙漿)，木聚糖酶0.05-10mg/g(干紙漿)，進行水解0-8h后，按照0.1-5g/L細胞的接種量接入產(chǎn)油微生物，在溫度25-35℃，pH4.5-6，溶氧10-90％條件下進行同步糖化油脂發(fā)酵，獲得含油菌體；

二、微生物油脂提取。

2.按照權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述亞銨法制漿，亞硫酸銨質(zhì)量濃度為10-20％；天然木質(zhì)纖維素與亞硫酸銨溶液固液比為1:5-10(g/ml)；于密閉容器中，采用兩次升溫脫除木質(zhì)素：第一次升溫至100-150℃，保溫20-60min，放汽2-10min；第二次升溫至110-170℃，保溫90-150min，過濾洗滌后得再生木質(zhì)纖維素，即紙漿。

3.按照權(quán)利要求1或3所述的方法，其特征在于：所述天然木質(zhì)纖維素包括：

農(nóng)林物秸稈、木材，農(nóng)作物種子皮的一種或是上述至少兩種的混合物；

具體說包括：稻草、麥秸、蘆葦秸稈、棉花秸稈、花生秸稈、花生殼，玉米秸稈、玉米葉、玉米穗皮、甘蔗渣的一種或者至少兩種的混合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述的產(chǎn)油微生物為能在細胞內(nèi)積累中性脂含量大于20％(w/w)的真核微生物或原核微生物。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：所述油脂發(fā)酵為批式油脂發(fā)酵、批式補料油脂發(fā)酵和連續(xù)油脂發(fā)酵。