[發(fā)明專(zhuān)利]用于篩查肺癌ALK-EML4融合基因的雙色FISH方法及試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410184329.8
• 申請(qǐng)日: 2014-04-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105018588A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-11-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 景曉輝;廖軍;陸宏卿;張瑞琪;李梅;舒麗
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 景曉輝
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及疾病相關(guān)基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體的，涉及肺癌相關(guān)融合基因檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是指一種肺癌相關(guān)融合基因FISH檢測(cè)方法和相關(guān)檢測(cè)探針及試劑盒。

背景技術(shù)

肺癌是發(fā)病率和死亡率增長(zhǎng)最快，對(duì)人群健康和生命威脅最大的惡性腫瘤之一。近50年來(lái)許多國(guó)家都報(bào)道肺癌的發(fā)病率和死亡率均明顯增高，男性肺癌發(fā)病率和死亡率均占所有惡性腫瘤的第一位，女性發(fā)病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明確，大量資料表明，長(zhǎng)期大量吸煙與肺癌的發(fā)生有非常密切的關(guān)系。

根據(jù)肺癌的生長(zhǎng)、侵犯及轉(zhuǎn)移速度和范圍以及對(duì)化療藥物和放射治療的敏感性，臨床將肺癌分為小細(xì)胞肺癌(SCLC)及非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)，后者占肺癌發(fā)病率80％左右。只有合理應(yīng)用手術(shù)、放療、化療、靶向治療等方法，才能獲得較好控制率，延長(zhǎng)生存期。

在過(guò)去的幾十年里，雖然科學(xué)家們不斷地探索非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)化療和放療的方法，但取得的成果仍不能令人滿意，例如晚期肺癌患者的平均生存時(shí)間仍未超過(guò)一年，療效不確定，部分患者會(huì)出現(xiàn)一些毒副反應(yīng)，如惡心、嘔吐等胃腸道反應(yīng)，影響了生活質(zhì)量，甚至中斷治療。傳統(tǒng)的細(xì)胞毒性化學(xué)藥物可比作是“殺敵一千，自損八百”，因而許多患者對(duì)此是談之色變，而靶向治療正是科學(xué)家們幾十年來(lái)致力于分辨癌細(xì)胞與正常細(xì)胞之間分子生物學(xué)差異的臨床研究成果。

所謂靶向治療，就是通過(guò)基因或分子的選擇，有針對(duì)性地殺死惡性腫瘤細(xì)胞，而幾乎不影響正常細(xì)胞。這一劃時(shí)代的生物腫瘤療法的特點(diǎn)可以總結(jié)為4個(gè)字：“高效低毒”。一方面，靶向治療大大提高了腫瘤治療的療效；另一方面，靶向治療減少患者在治療中的副作用，提高生活質(zhì)量。

靶向治療是指在分子生物學(xué)診斷的基礎(chǔ)上，利用肺癌細(xì)胞和正常細(xì)胞之間存在的差異，有針對(duì)性地抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，例如，采用拮抗受體、抑制腫瘤生長(zhǎng)所需的血管和阻斷腫瘤生長(zhǎng)的信號(hào)傳導(dǎo)通路等方法來(lái)抑制肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖，從而達(dá)到治療目的。

ALK-EML4融合基因是肺癌靶向治療新寵。ALK-EML4融合基因可見(jiàn)于多種腫瘤，例如間變性大細(xì)胞淋巴瘤、炎性成肌纖維細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤和非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)等，它是由第2號(hào)染色體短臂基因片段顛換(Inversion)引起。ALK-EML4的發(fā)現(xiàn)，代表了一種NSCLC的分子亞型，該組患者具有獨(dú)特的臨床特征：不能從EGFR-TKI靶向治療中獲益。接受EGFR-TKI治療的野生型患者和ALK陽(yáng)性患者相比，后者可能更容易產(chǎn)生耐藥。ALK-EML4的發(fā)現(xiàn)促使肺癌治療朝向“個(gè)體化”的目標(biāo)邁近了一步。雖然ALK-EML4融合基因僅有4％-10％的陽(yáng)性率，在ALK-EML4融合基因陽(yáng)性的患者中，其抑制劑Crizotinib的療效可達(dá)60％以上。美國(guó)FDA迅速批準(zhǔn)Crizotinib上市，對(duì)于ALK-EML4融合基因陽(yáng)性的患者是個(gè)福音。由于該基因較低的陽(yáng)性率，所以在使用前應(yīng)進(jìn)行基因檢測(cè)，只有在陽(yáng)性的患者中才建議使用。

ALK基因，間變型淋巴瘤激酶基因，定位于染色體2p23。FISH可檢測(cè)與ALK基因相關(guān)的染色體易位，包括EML4、TFG和KIF5B及其他基因融合。雅培Vysis?ALK雙色分離探針試劑盒是第一個(gè)針對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者新型亞類(lèi)的伴隨診斷試劑，適用于福爾馬林固定、石蠟包埋的非小細(xì)胞肺癌組織切片樣本。選擇XALKORI(crizotinib)藥物治療的必要條件是FISH檢測(cè)ALK陽(yáng)性的非小細(xì)胞肺癌。雅培Vysi?s?ALK雙色分離探針試劑盒和輝瑞的XALKORI(crizotinib)同時(shí)獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)。另外，此探針也可用于間變型大細(xì)胞淋巴瘤的輔助診斷。

然而，目前美國(guó)FDA批準(zhǔn)的ALK?FISH檢測(cè)試劑盒(雅培Vysis?ALK雙色分離探針試劑盒)僅能檢測(cè)ALK基因的斷裂，但不能判斷ALK斷裂后是否和EML4發(fā)生融合，因此提供給臨床醫(yī)生的信息不夠全面，不利于肺癌的精確分子分型和靶向治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的主要目的就是針對(duì)以上存在的問(wèn)題與不足，提供一種肺癌相關(guān)融合基因FISH檢測(cè)的改良方法，探針及試劑盒。該法設(shè)計(jì)周全，操作簡(jiǎn)單，特異性和敏感性高，可以快速，準(zhǔn)確，直觀地測(cè)出肺癌相關(guān)ALK-EML4融合基因，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而可作為醫(yī)師對(duì)肺癌進(jìn)行分子分型的參考依據(jù)，適用于大規(guī)模推廣應(yīng)用。