[發(fā)明專利]一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410183959.3
• 申請(qǐng)日: 2014-05-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104004677A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何萬(wàn)領(lǐng);李元曉;李曉麗;張廣勤;丁軻;李旺
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12R1/10
• 代理公司: 洛陽(yáng)公信知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)所(普通合伙) 41120
• 代理人: 羅民健

1.一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）將收集到的酒精工業(yè)黃水放入密封的容器中，取樣進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定，并根據(jù)測(cè)定值對(duì)所收集的酒精工業(yè)黃水進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)成分補(bǔ)充，備用；

（2）將步驟（1）中經(jīng)過(guò)營(yíng)養(yǎng)成分補(bǔ)充的酒精工業(yè)黃水進(jìn)行滅菌，pH調(diào)節(jié)至7.2~7.5，備用；

（3）將地衣芽孢桿菌在牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)至穩(wěn)定生產(chǎn)期，檢測(cè)活菌數(shù)不低于1×10^9?cfu/mL作為種子菌液，備用；

（4）將步驟（3）中所得到種子菌液按照6%~8%（v/v）的比例接種于經(jīng)步驟（2）處理所得的酒精工業(yè)黃水中，并于36℃~36.5℃的培養(yǎng)溫度下，在恒溫振蕩器上培養(yǎng)16h~18h，得到地衣芽孢桿菌菌液，備用；

（5）在步驟（4）中得到的地衣芽孢桿菌菌液中添加氯化鈣，其添加的量按照重量體積比（w/v）為0.05%~0.08%，然后在60℃水浴中加熱15min~20min，再轉(zhuǎn)入80℃水浴中加熱5min~10min，得到含有芽胞的菌液；

（6）將步驟（5）中含有芽孢的菌液用離心機(jī)進(jìn)行離心處理，棄去上清液，獲得地衣芽孢桿菌固體物；

（7）按照步驟（6）所得的地衣芽孢桿菌固體物與載體1:4~6的重量比例，添加碳酸鈣粉載體，并混合均勻，制成地衣芽孢桿菌固體混合物；

（8）將步驟（7）中得到的地衣芽孢桿菌固體混合物在無(wú)菌條件下，于60℃~65℃烘干，研磨成干粉；

（9）在步驟（8）得到的干粉中加入賦形劑，混合均勻，制成地衣芽孢桿菌制劑，并真空包裝。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟（2）中的滅菌在高壓滅菌鍋中進(jìn)行，滅菌條件為121℃溫度下滅菌15~20min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟（3）中的牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的配方是：牛肉膏5g、蛋白胨10g、氯化鈉5g、蒸餾水1000mL，其pH為7.2~7.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟（4）中的恒溫振蕩器的振動(dòng)頻率為200~220r/min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟（6）中離心處理所用的離心機(jī)的轉(zhuǎn)速為3500~4000r/min，離心時(shí)間為10~15min。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用酒精工業(yè)黃水生產(chǎn)地衣芽孢桿菌制劑的方法，其特征在于：所述步驟（9）中所述的賦形劑為乳糖和可溶性淀粉，并根據(jù)與所述干粉的重量比，其添加量為4%的乳糖和20%的可溶性淀粉。