[發(fā)明專利]一種pEGF基因工程乳酸乳球菌的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410183934.3
• 申請(qǐng)日: 2014-05-05
• 公開（公告）號(hào): CN104031962A
• 公開（公告）日: 2014-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 潘康成;周堯;賈賢奇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P21/02
• 分類號(hào): C12P21/02;C12N1/20
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生態(tài)學(xué)，微生物發(fā)酵領(lǐng)域，更具體涉及一種可顯著提高pEGF基因工程乳酸乳球菌生物量的發(fā)酵培養(yǎng)基。

技術(shù)背景

豬表皮生長(zhǎng)因子（porcine?epidermal?growth?factor?,pEGF）是表皮生長(zhǎng)因子的一種，是豬乳中含量最豐富的生長(zhǎng)因子之一。在豬初乳和常乳中表皮生長(zhǎng)因子濃度含量很高，且其受體在豬小腸的分布研究得最多，EGF與其受體結(jié)合可發(fā)揮生理功能。有研究表明豬表皮生長(zhǎng)因子具有多種生物學(xué)功能，如可刺激表皮和內(nèi)皮細(xì)胞的增殖；可刺激胃腸道的生長(zhǎng)以及誘導(dǎo)小腸消化酶的表達(dá)。對(duì)于初生的仔豬和早期斷奶仔豬，pEGF能夠影響其生產(chǎn)性能、免疫應(yīng)答和小腸的發(fā)育，誘導(dǎo)小腸消化酶的表達(dá)。此外，pEGF?具有促進(jìn)靜止期的初級(jí)母卵泡變成活化卵泡，從而加速卵子的排出，因此具有提高哺乳動(dòng)物的窩產(chǎn)仔數(shù)的功能。

乳酸乳球菌是一類能夠代謝糖類，產(chǎn)生50%以上乳酸的細(xì)菌通稱，包括乳酸乳球菌屬、乳球菌屬、雙歧桿菌屬、明串珠菌屬等至少23個(gè)屬。?其本身具有調(diào)節(jié)腸道微生態(tài)，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)成分在腸道的消化吸收，降低血清中的膽固醇含量，緩解高血壓以及抗腫瘤作用。乳酸乳球菌為兼性厭氧菌是全球公認(rèn)的食品級(jí)微生物，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，通過基因重組對(duì)其改造，有目的、有選擇地使乳酸乳球菌產(chǎn)生有益的異源基因的產(chǎn)物，制成微生態(tài)制劑和活菌疫苗等保健品或藥品，是乳酸乳球菌分子生物學(xué)研究的一個(gè)重要方向。

隨著基因工程技術(shù)的飛速發(fā)展，我們可以通過對(duì)乳酸乳球菌質(zhì)粒編碼特性的研究來構(gòu)建我們所需要的質(zhì)粒載體，通過一系列分子生物學(xué)手段例如轉(zhuǎn)導(dǎo)、結(jié)合、電轉(zhuǎn)化等，將其轉(zhuǎn)移到乳酸乳球菌中，使我們所需要的目的基因得以表達(dá)，從而使基因工程乳酸乳球菌集菌體、自身分泌物、外源蛋白于一體。將基因工程乳酸乳球菌應(yīng)用到飼料中，可以作為一種新型的飼料添加劑，其能夠產(chǎn)生抗微生物(尤其致病菌)物質(zhì)，還能夠調(diào)節(jié)動(dòng)物機(jī)體腸道內(nèi)的微生態(tài)平衡，增強(qiáng)動(dòng)物機(jī)體免疫力，從而促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，提高飼料轉(zhuǎn)化率。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了一種可以顯著提高pEGF基因工程乳酸乳球菌生物量的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基有如下組分組成：

????1）低蛋白乳清粉6.5~15g/L;

????2)?無水葡萄糖5~20g/L;

????3）蛋白胨5~15g/L;

????4）牛肉膏1~10g/L;

????5）酵母浸出粉1~5g/L;

6）維生素C?0.1~0.5g/L;

7）硫酸鎂0~0.25g/L;

8）硝酸鈉0~2g/L;

9）硫酸亞鐵0~0.4g/L;

10)所述發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基的pH值為5.8-7.0；所述發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基的培養(yǎng)時(shí)間為24~39h；所述發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基的接種量為2%~10%；所述發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)方式為靜置培養(yǎng)；所述發(fā)酵培養(yǎng)溫度為37℃。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有低蛋白乳清粉6.5~15g/L；較佳地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有低蛋白乳清粉6.5g/L。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有無水葡萄糖5~20g/L；較佳地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有無水葡萄糖5g/L。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有蛋白胨5~15g/L；較佳地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有蛋白胨15g/L。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有牛肉膏1~10g/L；較佳地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有牛肉膏1g/L。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有酵母浸出粉1~5g/L；較佳地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有酵母浸粉1g/L。

本發(fā)明中，所述的發(fā)酵培養(yǎng)基中含有維生素C0.1~0.5g/L；較佳地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有維生素C0.1g/L。

本發(fā)明優(yōu)選地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基中含有硫酸鎂0.25g/L；所述的硝酸鈉2g/L；所述的硫酸亞鐵0.4g/L。

本發(fā)明優(yōu)選地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基pH值為7.0；所述的發(fā)酵培養(yǎng)時(shí)間為27h；所述的接種量為10%；所述的培養(yǎng)方式為厭氧靜置培養(yǎng)；所述的發(fā)酵培養(yǎng)溫度為37℃。

本發(fā)明更優(yōu)選地，所述的發(fā)酵優(yōu)化培養(yǎng)基由如下組分組成：每1L培養(yǎng)基含低蛋白乳清粉6.5g，葡萄糖5g，蛋白胨15g，牛肉膏1g，酵母浸粉1g，維生素C0.1g,硫酸鎂0.25g，硝酸鈉2g，硫酸亞鐵0.4g。