[發明專利]一種羅丹明熒光納米復合粒子及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410183249.0
• 申請日: 2014-04-30
• 公開（公告）號: CN104004511A
• 公開（公告）日: 2014-08-27
• 發明（設計）人: 胡云睿;張念椿;馮衍秋;陳武凡;馮前進;龔劍;張志德;盧廣文;朱祥林
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C09K11/06
• 分類號: C09K11/06;C09K11/02;G01N33/58
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;張燕玲

技術領域

本發明屬于生物醫學熒光分析技術領域，具體涉及一種具有高穩定性和抗漂白性的羅丹明熒光納米復合粒子及其制備方法和應用。

背景技術

在生物學與醫學研究領域里，探索和發展高靈敏度的非同位素檢測方法一直是研究者十分關注的課題，其中熒光分析法是一種重要的非同位素方法，熒光標記生物分子(如蛋白質)在生物學研究和醫學研究各領域里發揮了重要的作用。但傳統的熒光分析方法存在一些難以克服的缺陷，1、多數熒光試劑存在光漂白的現象，導致熒光信號不穩定；2、熒光泄露現象嚴重；3、熒光試劑及其光解產物對活體細胞有一定的毒副作用；4、傳統的生物分子熒光標記方法，只能在生物分子的活性基團上連接少數的幾個熒光分子，分析靈敏度有限。隨著納米技術的發展，結合了納米技術與材料制備技術而發展起來的復合熒光染料顆粒的制備為生物醫學領域的研究提供了新的材料、技術和方法。

發明內容

為了克服現有技術的缺點與不足，本發明的首要目的在于提供一種熒光泄漏少，光化學穩定性高的羅丹明熒光納米復合粒子的制備方法；

本發明的另一目的在于提供上述制備方法得到的羅丹明熒光納米復合粒子；

本發明的再一目的在于提供上述羅丹明熒光納米復合粒子的應用。

本發明的目的通過下述技術方案實現：一種羅丹明熒光納米復合粒子的制備方法，包括以下操作步驟：

(1)將摩爾比為1：5～5：1的巰基化合物與羅丹明6G(Rhodamine6G)溶解在蒸餾水中反應，得到混合液；

(2)將步驟(1)所得混合液在保護氣體氛圍下，在低溫5℃～15℃且黑暗條件中進行反應；

(3)加入硅源前驅物、氨水和蒸餾水，置于密閉避光的容器中，于溫度50℃-150℃條件和1.5-4.5個標準大氣壓條件下進行反應，所述硅源前驅物與步驟(1)所述羅丹明6G的摩爾比為300：1～900：1；

(4)將步驟(3)所得產物離心分離、洗滌，得到羅丹明熒光納米復合粒子。

步驟(1)所述巰基化合物為巰基乙醇、巰基乙酸、苯硫酚或半胱氨酸。

步驟(3)所述硅源前驅物為正硅酸乙酯、正硅酸甲酯或硅酸鈉。

步驟(1)所述蒸餾水和羅丹明6G的摩爾比為100：1～200：1。

步驟(2)所述保護氣體為氮氣或氬氣。

步驟(3)所述硅源前驅物、氨水和蒸餾水的體積比為1∶1∶20～1∶4∶50。

一種根據上述方法制備的羅丹明熒光納米復合粒子。

上述羅丹明熒光納米復合粒子在生物標記領域中的應用，特別是在細胞標記中的應用。

上述的羅丹明熒光納米復合粒子在生物標記領域中的應用，特別是在細胞標記中的應用。

與現有技術相比，本發明具有以下優點及有益效果：

本發明羅丹明熒光納米復合粒子具備良好的生物安全性，易與各種生物分子通過多種方式偶聯，可以用來標記生物大分子，不會對生理活動造成危害；通過外殼材料的包被可以避免外界環境因素對粒子中熒光染料Rhodamine6G的漂白作用，其光學穩定性比傳統的標記法有明顯提高；包裹作用還能使更多的發光分子連接在生物分子上起到信號放大作用；該復合粒子不僅保持了染料分子的光學活性，而且染料在較大濃度下不會發生自聚、泄漏現象；本發明納米熒光復合型材料可應用于檢測生命體系內的痕量活性物質，以便在細胞和單分子水平上獲取生命過程的化學與生物信息，了解生物分子及其結構與功能的關系，對生命活動機理的闡釋和疾病的早期診斷具有非常重要的意義。

附圖說明

圖1是羅丹明熒光復合粒子的TEM圖(透射電子顯微鏡圖)。

圖2是羅丹明及羅丹明熒光復合粒子的熒光泄露圖，a為羅丹明單體的熒光泄露，b為羅丹明熒光復合粒子的熒光泄露。

圖3是羅丹明熒光納米復合粒子的激光共聚焦圖。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。

實施例1

(1)將摩爾比為1：5的巰基乙醇與羅丹明6G溶解在蒸餾水中，得到混合液；所述蒸餾水和羅丹明6G的摩爾比為100：1；

(2)將步驟(1)所得混合液在氮氣氛圍下，在低溫5℃且黑暗條件中進行偶合反應12h，得到Rhodamine6G-APS溶液；