[發明專利]生物電鏡樣品碳化方法

有效

• 申請號: 201410183132.2
• 申請日: 2014-05-03
• 公開（公告）號: CN105021432B
• 公開（公告）日: 2019-01-15
• 發明（設計）人: 高鴻建
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

1.一種生物電鏡樣品碳化方法，其特征在于，采用0.1M四氧化鋨液體的揮發性氣體對生物有機樣品進行熏蒸、灼燒，使生物有機樣品完全碳化；其包括下述步驟：

1)樣品處理：

取離體動物或人體的器官組織塊，常規處理后，用2.5％戊二醛固定2小時或者更長時間，4℃冷藏固定2小時以上，緩沖液漂洗2次，每次10分鐘；

2)取電鏡鎳網做支架，將組織塊除去表面水漬，置于電鏡鎳網上面；或，將有機高分子物質的懸浮液滴在含有碳膜的載網上面，經3-5分鐘的吸附，除去上清多余懸液，微干備用；

3)取底部加100ul的1％濃度的四氧化鋨溶液的離心管，使其橫置、形成底部的液態漲力留置；

4)將置有組織的鎳網支架轉移至離心管的中部或者口端部，離心管封蓋以及加封口膜封口、標注樣品性質、樣品標記號，集合多個離心管樣品放入統一的器皿，再封口，標注碳化起始時間；

5)轉移到冰箱4度冷藏空間開始碳化，不同的組織碳化時間在24—72小時之間；

6)取出已碳化的樣品，轉移樣品到新的離心管中、開蓋放置37℃溫箱3-4小時，加蓋封口保存；

7)噴金、掃描電鏡觀察。

2.按權利要求1所述的生物電鏡樣品碳化方法，其特征在于，所述的生物電鏡樣品包括生物樣品組織或細菌。

3.按權利要求1所述的生物電鏡樣品碳化方法，其特征在于，所述的離心管為1ml或1.5mlEP離心管。

4.按權利要求1所述的生物電鏡樣品碳化方法，其特征在于，所述的生物電鏡樣品是多聚賴氨酸。