[發明專利]一種小肽、其合成方法及其增強家畜免疫力的用途

有效

• 申請號: 201410182772.1
• 申請日: 2014-04-30
• 公開（公告）號: CN103923178B
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 周梅仙;張敦林;毛善國;周業飛;華春
• 申請（專利權）人: 南京曉莊學院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/06;A23K20/147
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司32200
• 代理人: 曹翠珍

發明領域

本發明涉及一種增強免疫力活性小肽，具體地說是涉及增強免疫力活性小肽及其制備方法。

背景技術

肽是氨基酸的線性聚合物，含氨基酸殘基50個以上的通常稱為蛋白質，低于50個氨基酸殘基的稱為肽。小肽也稱寡肽，一般是指由2-10個氨基酸組成。現已證實小肽能完整地被吸收進入血液循環，在機體發揮著重要的生物學功效。動物為了達到最佳免疫性能和生產性能，必須需要一定數量的小肽。近年來，隨著現代生物技術特別是現代微生物發酵技術的發展，目前市場上已有許多通過水解動植物蛋白、微生物發酵等工藝生產的蛋白質-肽-氨基酸混合制品,逐漸廣泛的還被用于醫藥、保健品和化妝品等行業，還作為一種新型的飼料原料或添加劑用于畜牧業生產。

目前市場上可見到的增強免疫力活性小肽是大多由動物的小腸和腸粘膜加工而成的肽蛋白或是含有一定量的小肽的肽蛋白飼料或飼料添加劑，雖然也能提高動物的免疫力和生產性能，降低腹瀉率和增強動物抗病力，但是大都存在以下缺陷：(1)產品的添加量較大0.1～1.5％；(2)產品功能不明確，功效不明顯；(3)肽的分子量較大，一般為6000左右，仍然具有抗原性，對動物不利，易引起動物過敏反應；(4)制備成本高或產品成本高，不適于動物養殖使用。

目前市場上制備增強免疫力活性小肽的方法主要是酶解法，一般分為直接酶解法和微生物發酵法。直接酶解法使用高價格的酶，如使用木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶等植物蛋白酶，或是使用胰蛋白酶、胃蛋白酶等動物蛋白酶，但容易產生令人難以接受的腥味或苦味，且生產成本高，因而限制了其在相關行業中的應用；微生物發酵法雖然具有原料來源廣泛、反應條件溫和、生產成本低、環保等優點，但該法對于肽的提取難度大，產率低、成本高，對于其對機體的作用機制也難以闡述；第二是DNA重組技術法，該法由于小分子基因片段操作、表達與檢測均存在著不少困難，且不易篩選到高效表達的菌株以及菌株的產量較低，同時因許多消費者反對使用由遺傳改性生物所生產的食物產品，并擔心有生物安全性和生物污染，而受到限制。

發明內容

本發明的目的在于為了克服現有技術的不足，提供一種增強免疫力活性小肽，用量低、但免疫功能明確，能顯著提高動物(家畜)對營養素(如蛋白質、礦物質、維生素等)的吸收利用率、提高奶、肉、蛋的產量和生產能力，改善肉、蛋、奶的品質和風味，刺激動物免疫器官發育、提高抗病力、減少發病率，并能明顯改善水產動物養殖水質，提高水產動物生長速度和存活率，廣泛用于禽、牛、羊、豬、水產和經濟動物，可作為抗生素的替代品。

本發明的另一目的在于提供生物活性小肽的合成方法，所得增強免疫力活性小肽為純品。

本發明的目的是通過如下技術方案實現的：

小肽的合成方法，包括GE-C增強免疫力活性肽的合成和純化，其中GE-C增強免疫力活性肽合成路線如下：

試劑說明：(a)DIEA,DCC,HOBt；(b)TFA,CH₂Cl₂；(c)1NNaOH,CH₃OH.

以上合成路線的具體說明如下：

在冰浴條件下，以DIEA為縛酸劑，DCC與HOBt為混合縮合劑，二氯甲烷為溶劑,異亮氨酸酸甲酯鹽酸鹽(化合物2)與Boc-脯氨酸(化合物1)反應得到Boc-Pro-Ile-OMe(化合物3)，然后同樣在冰浴條件下下將所得的Boc-Pro-Ile-OMe與三氟醋酸反應，得到Pro-Ile-OMe三氟醋酸鹽(化合物4)。

按照合成化合物3的反應條件，以亮氨酸甲酯鹽酸鹽(化合物6)與Boc-絲氨酸(化合物5)反應得到純Boc-Ser-Leu-OMe(化合物7)，然后同樣在冰浴條件下下將所得的Boc-Ser-Leu-OMe與三氟醋酸反應，得到Ser-Leu-OMe三氟醋酸鹽(化合物8)。

同樣，按照合成化合物3的反應條件，以Boc-Tyr-OH(化合物9)和Pro-Ile-OMe鹽酸鹽(化合物4)為原料，合成得到Boc-Tyr-Pro-Ile-OH(化合物11)。

以化合物8和化合物11為原料合成Boc-Tyr-Pro-Ile-Ser-Leu-OMe(化合物12)，然后用NaOH將其水解，最后用三氟醋酸(TFA)處理脫去Boc保護基，得到Tyr-Pro-Ile-Ser-Leu-OH(化合物13)。

以下將具體說明所獲得的增強免疫力活性小肽的用途

該增強免疫力活性肽的使用方法為：直接口服或加入水中飲用和肌肉注射。

(1)對雞外周血PBMC細胞增殖活力的影響