[發明專利]同時檢測兩種急性白血病標志物電化學傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201410181470.2
• 申請日: 2014-04-30
• 公開（公告）號: CN103940872A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 王宗花;趙凱;夏建飛;宋岱珉;張菲菲;夏霖;遲德玲;李延輝;夏延致;夏臨華
• 申請（專利權）人: 青島大學
• 主分類號: G01N27/26
• 分類號: G01N27/26;G01N27/327
• 代理公司: 濟南舜源專利事務所有限公司 37205
• 代理人: 邵朋程

技術領域

本發明涉及一種同時檢測兩種急性白血病標志物電化學傳感器的制備方法及應用，屬于臨床分析及生物電化學傳感技術領域。

背景技術

在當今社會中，癌癥是嚴重威脅人類身體健康的疾病之一。癌癥患者的死亡率很高的最主要的原因是，不能進行早期診斷，如果能早期診斷及時治療，1/3的癌癥可以治愈。而血清腫瘤標志物的測定對癌癥的早期診斷起著重要的作用。因此，建立準確、快速檢測血清中腫瘤標志物的分析方法及相應的設備引起了人們的高度重視。

急性白血病是兒童和青年中最常見的一種惡性腫瘤，對兒童身體健康的危害極大，其早期診斷對有效治療具有十分重要的意義。傳統診斷方法多依靠腫瘤組織或細胞形態上的變化來進行的，但判斷難度大、準確率低，而且一旦在組織及細胞形態上確定癌癥發生，往往已進入中晚期，難以進行有效治療。由于癌細胞變化的過程主要是由復雜的分子水平的變化所誘導的，因此研究分子水平上的差異，對此水平的標志性物質進行靈敏及特異性識別和檢測，有望實現癌癥的高效早期診斷。

發明內容

本發明的目的在于提供一種同時檢測兩種急性白血病標志物電化學傳感器的制備方法及應用。

本發明所采用的技術解決方案是：

一種同時檢測兩種急性白血病標志物電化學傳感器的制備方法，包括以下步驟：

(1)將溶菌酶報告探針和γ-干擾素報告探針分別在含有三(2-氯乙基)磷酸酯的溶液中靜置，以打開二硫鍵；再向溶液中添加溶菌酶適體和γ-干擾素適體，溶菌酶報告探針和溶菌酶適體形成溶菌酶報告探針-適體雙鏈結構，γ-干擾素報告探針和γ-干擾素適體形成γ-干擾素報告探針-適體雙鏈結構；

(2)對金電極進行預處理，將處理好的金電極浸在經過步驟(1)預處理后的溶菌酶報告探針-適體雙鏈和γ-干擾素報告探針-適體雙鏈混合液中，室溫靜置過夜，之后用二次蒸餾水和清洗液清洗；

(3)將步驟(2)處理后的電極浸在含有6-巰基-1-己醇的溶液中，以封閉電極，之后用二次蒸餾水和清洗液清洗；

(4)將步驟(3)處理后的電極作為工作電極，和參比電極、對電極連接在化學工作站上，以得到可同時檢測兩種急性白血病標志物的電化學傳感器。

優選的，步驟(1)中：所述溶菌酶報告探針為5’-巰基-C6-GTGCAGAGCTAAGTAACTCTGCAC-亞甲基藍-3’，所述溶菌酶適體為5’-ATC?AGG?GCT?AAA?GAG?TGC?AGA?GTT?ACT?TAG-3’，所述γ-干擾素報告探針為5’-巰基-C6-TTCAACCAACTTTTTTTTTTCAACACCCAT-二茂鐵-3’，所述γ-干擾素適體為5’-GGG?GTT?GGT?TGT?GTT?GGG?TGT?TGT?GT-3’。

優選的，步驟(1)中：所述溶液中溶菌酶報告探針-適體雙鏈的濃度為1μmol/L，γ-干擾素報告探針-適體雙鏈的濃度為1μmol/L；所述溶液中含有0.5μL10mmol/L三(2-氯乙基)磷酸酯，還含有20mmol/L?Tris-HCl、140mmol/L?NaCl、20mmol/L?MgCl₂以及20mmol/L?KCl，溶液pH值為7.4。

優選的，步驟(1)中：所述靜置過程在室溫下進行，靜置時間為2小時。

優選的，步驟(2)中所述金電極的預處理過程如下：金電極用0.3μm的Al₂O₃粉打磨成鏡面，二次蒸餾水清洗后，相繼在二次蒸餾水和乙醇溶液中超聲50s；將清洗干凈的金電極在0.5mol/L的硫酸溶液中循環伏安掃描至穩定，掃描電壓為0.2～1.65V，掃描速度為0.1V/s，然后用二次蒸餾水沖洗干凈，室溫晾干。

優選的，步驟(3)中：所述溶液中MCH的濃度為2mmol/L，溶液中還含有20mmol/L?Tris-HCl、140mmol/L?NaCl、20mmol/L?MgCl₂以及20mmol/L?KCl，溶液pH值為7.4。

優選的，步驟(2)與步驟(3)中：所述清洗液為濃度10mmol/L的Tris-HCl緩沖溶液，溶液pH值為7.4。

上述制備的電化學傳感器用于兩種急性白血病標志物溶菌酶和γ-干擾素的同時檢測。

上述檢測方法具體包括以下步驟：