[發(fā)明專利]李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410178017.6
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103941012A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉箐;李建武;楊標(biāo)
• 申請（專利權(quán)）人: 上海理工大學(xué)
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577
• 代理公司: 上海德昭知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于微生物檢測領(lǐng)域。具體而言，本發(fā)明涉及一種李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條。

背景技術(shù)

李斯特菌(Listeriaspp.)是一種短小的革蘭氏陽性無芽胞兼性厭氧桿菌，共有單核細(xì)胞增生李斯特菌(Listeria?monocytohenes)、綿羊李斯特菌(Listeria?iuanuii)、英諾克李斯特菌(Listeria?innocua)、威爾斯李斯特菌(Listeria?welshimeri)、西爾李斯特菌(Listeria?seeligeri)、格氏李斯特菌(Listeria?grayi)、默氏李斯特菌(Listeria?murrayi)七個(gè)菌株，其中單核細(xì)胞增生李斯特菌是李斯特菌屬中致病力最強(qiáng)的細(xì)菌，也是唯一對人致病的、典型的胞內(nèi)寄生菌，可以導(dǎo)致嚴(yán)重的人畜共患傳染病，如腦膜炎、敗血癥、流產(chǎn)和單核細(xì)胞增多等癥狀。1988年，世界衛(wèi)生組織(World?Health?Organization，WHO)發(fā)表“食源性李斯特菌病勸告書”，指導(dǎo)全世界各國如何預(yù)防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成為新的重要的食源性疾病病原菌，WHO將其與E.coliO157、沙門氏菌以及金黃色葡萄球菌并列為20世紀(jì)90年代四大食源性致病菌。該菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香腸、加工禽類、生肉、魚、蝦、煙熏魚、生蔬菜。

目前李斯特菌的檢測主要依賴于國標(biāo)所規(guī)定的生化鑒定，其缺點(diǎn)是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應(yīng)大量的樣品篩查。免疫學(xué)檢測是近年來出現(xiàn)的最快速、準(zhǔn)確、穩(wěn)定的快速檢測手段，但是檢測產(chǎn)品全部依賴進(jìn)口，我國目前尚無擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)，且可運(yùn)用于檢測實(shí)踐的快速檢測產(chǎn)品，該專利以李斯特菌為檢測靶標(biāo)，所要求保護(hù)的技術(shù)涉及李斯特菌快速檢測產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供一種李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條。

一種李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條，具有襯板，以及在襯板上依次排列的樣品墊、金標(biāo)墊、NC膜和吸收墊，其特征在于：

其中，由保藏號為CGMCCNo.8002的雜交瘤細(xì)胞株6D4H7C8B6產(chǎn)生的單克隆抗體作為金標(biāo)抗體偶聯(lián)膠體金，由保藏號為CGMCCNo.8765的雜交瘤細(xì)胞株1B4E7A6C9產(chǎn)生的單克隆抗體作為檢測抗體，金標(biāo)抗體偶聯(lián)膠體金后噴涂于金標(biāo)墊上，檢測抗體噴涂于NC膜上形成檢測線。

另外，本發(fā)明還提供了李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條在檢測食品中的李斯特菌中的應(yīng)用。

發(fā)明作用與效果

根據(jù)本發(fā)明的李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條，由于采用了配對單克隆抗體分別噴涂金標(biāo)墊和檢測線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果對李斯特菌的檢測特異性和靈敏性均較高。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例中單克隆抗體純度測定的結(jié)果；

圖2是本發(fā)明實(shí)施例中李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的各抗體偶聯(lián)膠體金的最佳pH的檢測結(jié)果；

圖3是本發(fā)明實(shí)施例中李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的各抗體偶聯(lián)膠體金的最佳結(jié)合量的檢測結(jié)果；

圖4是本發(fā)明李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖；

圖5是本發(fā)明李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的各抗體組合配對結(jié)果；

圖6是本發(fā)明李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的靈敏度測定結(jié)果；

圖7是本發(fā)明李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的交叉反應(yīng)結(jié)果；以及

圖8是本發(fā)明實(shí)施例中李斯特菌免疫膠體金快速檢測試紙條的模擬帶菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

保藏信息

1.產(chǎn)生抗單核細(xì)胞增生李斯特菌單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株6D4H7C8B6于2013年07月16日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC，中國，北京市)，保藏號為CGMCCNo.8002。

2.抗單核細(xì)胞增生李斯特菌雜交瘤細(xì)胞1B4E7A6C9于2014年01月09日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心(CGMCC，中國，北京市)，保藏號為CGMCCNo.8765。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明人的研究表明，以單核細(xì)胞增生性李斯特菌作為免疫原，免疫Balb/c小鼠，分離純化得到抗李斯特菌單克隆抗體1B4E7A6C9和6D4H7C8B6，其抗體效價(jià)可達(dá)到1:100000，其能夠特異性、高效地與李斯特菌結(jié)合，與豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內(nèi)氏志賀、鮑氏志賀、副溶血弧菌、阪崎腸桿菌、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等均無交叉反應(yīng)。