[發明專利]一種蜈蚣藻寡糖及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410177890.3
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103951760A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 王順春;施松善;王宏偉;丁侃;劉海玲;王崢濤;胡之璧
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學;中國科學院上海藥物研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;A61K31/734;A61P35/00
• 代理公司: 上海海頌知識產權代理事務所(普通合伙) 31258
• 代理人: 何葆芳

技術領域

本發明屬于天然藥物技術領域，具體說，是涉及一種蜈蚣藻寡糖及其制備方法和應用。

背景技術

蜈蚣藻(Grateloupia?filicina?C.Ag.)屬于紅藻門、真紅藻綱、隱絲藻目、海膜科、蜈蚣藻屬藻類，自古以來就作為一種海洋中藥，具有清熱解毒和驅蟲之功效，并且資源豐富，在全國沿海均有著廣泛的分布，并被當地人們所食用。多糖作為蜈蚣藻的主要化學成分，以半乳聚糖硫酸酯為主，國內外的研究充分表明蜈蚣藻多糖具有良好的抗凝血、抗病毒、抗腫瘤等多種生物活性，說明其有較大的開發利用價值。較多糖而言，寡糖具有分子量較小、結構簡單、質量易控及良好的成藥性等特點。但是到目前為止，未見有關蜈蚣藻寡糖及其活性研究的相關報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題在于：提供一種具有確切結構的蜈蚣藻寡糖G19及其制備方法和應用，以拓寬蜈蚣藻的應用。

為實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種蜈蚣藻寡糖，其分子式為C₄₈H₇₆O₅₂S₄Na₄，由一個4-硫酸基-β-D-半乳糖非還原末端以及3個1,4-β-D-半乳糖和3個4-硫酸基-1,3-β-D-半乳糖交替鏈接而成，并以一個3,6-脫水-1,4-D-半乳糖為還原末端，其化學結構如下：

一種制備本發明所述的蜈蚣藻寡糖的方法，是先將蜈蚣藻多糖進行酸性水解，然后進行分離純化。

作為一種優選方案，所述制備方法具體包括如下步驟：

a)制備蜈蚣藻多糖；

b)將步驟a)得到的蜈蚣藻多糖先用鹽酸溶液在60～100℃下進行水解，將水解液用氫氧化鈉溶液中和后濃縮、醇沉、離心去除蜈蚣藻多糖沉淀，收集上清液進行干燥；

c)將步驟b)得到的殘渣溶于水中，進行柱層析，依次用水、0.02～0.1mol/L?NaCl溶液和1.5～2.5mol/L?NaCl溶液洗脫，收集各部分洗脫液；

d)將步驟c)得到的0.05mol/L?NaCl溶液洗脫部分經脫鹽后進行柱層析，然后依次用水、0.01mol/L?NaCl溶液和1.0～2.0mol/LNaCl溶液進行洗脫，收集洗脫液，繪制洗脫曲線，按出峰先后順序將0.01mol/L?NaCl溶液洗脫部位分成A和B兩部分；

e)將步驟d)得到的A部分洗脫液干燥后加水溶解，然后離心取上清液進行柱層析，用0.15～0.2mol/L?NaCl溶液洗脫，收集相對保留時間為0.88～0.91之間的組分；

f)將步驟e)所得相對保留時間為0.88～0.91的組分再次進行柱層析純化，即得所述的蜈蚣藻寡糖，簡記為G19。

作為進一步優選方案，步驟b)中所述鹽酸溶液的濃度為0.01mol/L，所述氫氧化鈉溶液的濃度為2mol/L。

作為進一步優選方案，步驟c)中柱層析所用的色譜柱為Q?Sepharose?Fast?Flow強陰離子交換凝膠柱；步驟d)中柱層析所用的色譜柱為Sephadex?G10凝膠柱；步驟e)和步驟f)中柱層析所用色譜柱均為Superdex30葡聚糖凝膠柱。

本發明所述的蜈蚣藻寡糖(G19)可作為活性成分之一或唯一活性成分用于制備抗腫瘤藥物；所述的腫瘤包括神經膠質瘤、肝癌、胰腺癌、肺腺癌等。

本發明從蜈蚣藻中分離純化得到蜈蚣藻寡糖G19，而且實驗證明：本發明提供的蜈蚣藻寡糖G19能夠在體外及體內抑制腫瘤細胞的生長，但不影響正常肝細胞的生長，且研究表明蜈蚣藻寡糖G19的這一抑制作用與腫瘤細胞周期阻滯及腫瘤細胞凋亡相關，因此，本發明提供的蜈蚣藻寡糖G19具有開發成低毒高效的抗腫瘤藥物的潛在價值。

附圖說明

圖1為蜈蚣藻寡糖G19特征液相色譜圖；

圖2為蜈蚣藻寡糖G19糖組成分析特征氣質聯用總離子流圖；

圖3為蜈蚣藻寡糖G19絕對構型分析特征氣質聯用總離子流圖，A為G19總離子流圖，B為標準品總離子流圖；

圖4為蜈蚣藻寡糖G19特征紅外光譜圖；

圖5為蜈蚣藻寡糖G19特征¹H-NMR圖譜；

圖6為蜈蚣藻寡糖G19的¹³C-NMR測試圖譜，其中，A為G19的¹³C-NMR特征圖譜，B為Dept135圖譜；

圖7為蜈蚣藻寡糖G19特征1H-1H?COSY圖譜；