[發明專利]一種基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法在審
| 申請號： | 201410177384.4 | 申請日： | 2014-04-29 |
| 公開（公告）號： | CN105018581A | 公開（公告）日： | 2015-11-04 |
| 發明（設計）人： | 孫子奎;高文學;丁方美;王鋒;方鈺 | 申請（專利權）人： | 上海桑尼生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 201401 上海市嘉*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 測序法 檢測 蛋白 基因型 方法 | ||
1.一種基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：
根據β-酪蛋白的堿基序列，在6號內含子和7號內含子上設計出一對引物，用引物擴增出7號外顯子的片段，所述7號外顯子的片段大小為759bp，所述引物的序列為：
上游引物：5’ACC?CCA?ATT?TCT?TAA?CCA?AAC?C3’
下游引物：5’CTC?AGC?TAT?GCT?TAT?TTT?GGA?ACC3’；
用引物對待檢測的奶牛基因組DNA進行PCR擴增；
PCR產物用膠回收試劑盒純化后，用測序儀進行測序，根據測序分型結果進行判斷β-酪蛋白的基因型。
2.根據權利要求1所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，根據測序分型結果進行判斷β-酪蛋白的基因型，具體為：
如果β-酪蛋白的67位氨基酸為組氨酸或密碼子為CAT,則β-酪蛋白為A1β-酪蛋白；
如果β-酪蛋白的67位氨基酸為脯氨酸或密碼子為CCT,則β-酪蛋白為A2β-酪蛋白；
如果β-酪蛋白的67位氨基酸為一個雜合子或序列為CC/AT,則β-酪蛋白為A1A2β-酪蛋白。
3.根據權利要求2所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述A2β-酪蛋白的106位氨基酸的密碼子為CAC。
4.根據權利要求2所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述A2β-酪蛋白的122位氨基酸的密碼子為AGC。
5.根據權利要求1至4任一所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR擴增的體系為DNA模板50ng、熱啟動Taq?DNA聚合酶0.1Μ/μl、2.5μM?dNTP2μl、10μM上下游引物各1μl、2×Lengend?PCR?Bμffer10μl、加ddH2O至50μl。
6.根據權利要求5所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR擴增的條件：在溫度為92-95℃時預變性5min，然后在溫度為92-95℃時變性15s、在溫度為52-68℃時退火30s、在溫度為68-72℃時延伸30s，進行多個循環，最后在溫度為68-72℃時延伸7min。
7.根據權利要求6所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR擴增進行35個循環。
8.根據權利要求7所述基于測序法檢測β-酪蛋白基因型的方法，其特征在于，所述PCR擴增的條件：在溫度為95℃時預變性5min，然后在溫度為95℃時變性15s、在溫度為63℃時退火30s、在溫度為72℃時延伸30s，進行35個循環，最后在溫度為72℃時延伸7min。
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