[發明專利]檢測單核細胞增生性李斯特菌的方法及其單抗

有效

• 申請號: 201410177009.X
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103941011A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 劉箐;李森;曾海娟
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;C07K16/12;C12N5/20;C12R1/91
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于微生物檢測領域。具體而言，本發明涉及一種檢測單核細胞增生性李斯特菌的方法、用于該方法的兩株抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體以及產生該單克隆抗體的雜交瘤細胞。

背景技術

單核細胞增生李斯特菌(Listeria?monocytogenes)是一種短小的革蘭氏陽性無芽胞兼性厭氧桿菌，是李斯特菌屬中致病力最強的細菌，也是唯一對人致病的、典型的胞內寄生菌，可以導致嚴重的人畜共患傳染病，如腦膜炎、敗血癥、流產和單核細胞增多等癥狀。1988年，世界衛生組織(World?Health?Organization，WHO)發表“食源性李斯特菌病勸告書”，指導全世界各國如何預防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成為新的重要的食源性疾病病原菌，WHO將其與E.coli?O157、沙門氏菌以及金黃色葡萄球菌并列為20世紀90年代四大食源性致病菌。該菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香腸、加工禽類、生肉、魚、蝦、煙熏魚、生蔬菜。

目前單核細胞增生李斯特菌的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但是檢測產品全部依賴進口，我國目前尚無擁有完全自主知識產權，且可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以單核細胞增生李斯特菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及單核細胞增生性李斯特菌快速檢測產品。

發明內容

本發明的目的是提供一種體外檢測單核細胞增生性李斯特菌的方法。

本發明的另一個目的是提供用于上述方法的兩株由同一次單克隆抗體制備過程產生的可特異性地結合于單核細胞增生性李斯特菌不同抗原位點的單克隆抗體。

本發明的另一個目的是提供產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞。

本發明的第一方面是提供了一種體外檢測單核細胞增生性李斯特菌的方法，包括以下步驟：

(a)將待測樣品加樣于包被有捕捉抗體的固相載體，從而使待測樣品中的單核細胞增生性李斯特菌與固相載體上的捕捉抗體結合，形成帶有“單核細胞增生性李斯特菌-捕捉抗體”二元復合物的固相載體；所述的捕捉抗體是特異性地結合于單核細胞增生性李斯特菌的單克隆抗體1B4E7A6C9，所述的單克隆抗體1B4E7A6C9由小鼠雜交瘤細胞系1B4E7A6C9，CGMCC?No.8765產生；

(b)將檢測抗體加樣于(a)獲得的固相載體，從而形成帶有“檢測抗體-單核細胞增生性李斯特菌-捕捉抗體”三元復合物的固相載體；所述的檢測抗體是特異性地結合于單核細胞增生性李斯特菌的單克隆抗體6D4H7C8B6，所述的單克隆抗體6D4H7C8B6由小鼠雜交瘤細胞系6D4H7C8B6，CGMCC?No.8002產生，且所述的單克隆抗體6D4H7C8B6攜帶一可檢測標記物；和

(c)檢測三元復合物中的可檢測標記物，從而確定待測樣品中單核細胞增生性李斯特菌的存在與否以及存在的量。

在一優選例中，所述的固相載體為酶標反應板。

在另一優選例中，所述的可檢測標記物為辣根過氧化物酶。

本發明的第二方面是提供了一種免疫球蛋白，它是特異性地結合于單核細胞增生性李斯特菌的單克隆抗體，它由小鼠雜交瘤細胞系1B4E7A6C9，CGMCC?No.8765所產生。

本發明的第三方面是提供了一種產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞，它是小鼠雜交瘤細胞系1B4E7A6C9，CGMCC?No.8765。

本發明的第四方面是提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于檢測單核細胞增生性李斯特菌。

本發明的第五方面是提供了一種免疫球蛋白，它是特異性地結合于單核細胞增生性李斯特菌的單克隆抗體，它由小鼠雜交瘤細胞系6D4H7C8B6，CGMCC?No.8002所產生。

本發明的第六方面是提供了一種產生上述單克隆抗體的雜交瘤細胞，它是小鼠雜交瘤細胞系6D4H7C8B6，CGMCC?No.8002。

本發明還提供了上述免疫球蛋白的用途，它被用于檢測單核細胞增生性李斯特菌。

本發明各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發明的特點、目的和優勢將更為明顯。

附圖說明

圖1本發明的單克隆抗體的SDS-PAGE電泳圖

Lane1：1B4E7A6C9，Lane2：6D4H7C8B6

具體實施方式

單克隆抗體