[發明專利]單核細胞增生性李斯特菌酶聯免疫檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410176192.1
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103940995A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 劉箐;郭慧琴;吳淑燕
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于生物技術和免疫學領域，具體涉及一種檢測單核細胞增生性李斯特菌的酶聯免疫試劑盒。

背景技術

單核細胞增生李斯特菌(Listeria?monocytogenes)是一種短小的革蘭氏陽性無芽胞兼性厭氧桿菌，是李斯特菌屬中致病力最強的細菌，也是唯一對人致病的、典型的胞內寄生菌，可以導致嚴重的人畜共患傳染病，如腦膜炎、敗血癥、流產和單核細胞增多等癥狀。1988年，世界衛生組織(World?Health?Organization，WHO)發表“食源性李斯特菌病勸告書”，指導全世界各國如何預防李斯特菌污染和中毒。自此，LM成為新的重要的食源性疾病病原菌，WHO將其與E.coli?O157、沙門氏菌以及金黃色葡萄球菌并列為20世紀90年代四大食源性致病菌。該菌主要污染牛奶及乳制品、乳酪制品、肉制品香腸、加工禽類、生肉、魚、蝦、煙熏魚、生蔬菜。

目前單核細胞增生李斯特菌的檢測主要依賴于國標所規定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩定的快速檢測手段，但是檢測產品全部依賴進口，我國目前尚無擁有完全自主知識產權，且可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以單核細胞增生李斯特菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及單核細胞增生性李斯特菌快速檢測產品。

發明內容

本發明的目的是提供一種檢測單核細胞增生性李斯特菌的試劑盒。

進而，本發明提供了一種用于檢測單核細胞增生性李斯特菌的酶聯免疫試劑盒，所述的試劑盒含有：

(a)固相載體，所述的固相載體上包被有作為捕捉抗體的抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體1B4E7A6C9，所述的抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體1B4E7A6C9由小鼠雜交瘤細胞系1B4E7A6C9，CGMCC?No.8765產生；

(b)容器a，所述的容器a中裝有作為檢測抗體的抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體6D4H7C8B6，所述的抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體6D4H7C8B6由小鼠雜交瘤細胞系6D4H7C8B6，CGMCC?No.8002產生。

在一優選例中，所述的固相載體為酶標反應板。

在另一優選例中，所述的檢測抗體帶有可檢測的標記物。

在另一優選例中，所述的可檢測的標記物為辣根過氧化物酶。

在另一優選例中，所述的試劑盒還含有陽性對照和陰性對照。

在另一優選例中，所述的陽性對照為滅活的單核細胞增生性李斯特菌菌液，所述的陰性對照為滅菌的李氏增菌肉湯。

本發明各個方面的細節將在隨后的章節中得以詳盡描述。通過下文以及權利要求的描述，本發明的特點、目的和優勢將更為明顯。

具體實施方式

本發明人的研究表明，以單核細胞增生性李斯特菌作為免疫原，免疫Balb/c小鼠，分離純化得到兩株抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體，即1B4E7A6C9，CGMCC?No.8765和6D4H7C8B6，CGMCC?No.8002，上述兩株單克隆抗體的抗體效價可達到1:100000，其能夠特異性、高效地與單核細胞增生性李斯特菌結合。以上述單克隆抗體1B4E7A6C9包被酶標反應板作為捕捉抗體，用辣根過氧化物酶標記的上述單克隆抗體6D4H7C8B6作為檢測抗體，制作酶聯免疫檢測試劑盒。結果顯示，上述單核細胞增生性李斯特菌檢測試劑盒檢測靈敏度達到10⁵cfu/ml，具有重復性、準確性好的優點，孔間誤差小于5％，板內CV小于3％。其與出血性大腸桿菌O157:H7、豬霍亂沙門、鼠傷寒沙門、腸炎沙門、福氏志賀、宋內氏志賀、鮑氏志賀、副溶血弧菌、阪崎腸桿菌、小腸耶爾森氏菌、肺炎鏈球菌、蠟樣芽孢桿菌等共計68種病原細菌均無交叉反應。

在此基礎上，本發明人進而根據雙抗體夾心酶聯免疫法，經過反復測試，終于獲得了一種可快速、高效檢測食源性單核細胞增生性李斯特菌的酶聯免疫試劑盒。

抗體

本發明包括兩株抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體。本發明的兩株抗單核細胞增生性李斯特菌單克隆抗體可以利用小鼠雜交瘤細胞系1B4E7A6C9(CGMCC?No.8765)和小鼠雜交瘤細胞系6D4H7C8B6(CGMCC?No.8002)分別分泌產生。