[發(fā)明專利]一種無創(chuàng)檢測胎兒耳聾致病基因突變的方法及試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410174277.6
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN105087756A
• 公開（公告）日: 2015-11-25
• 發(fā)明（設計）人: 劉異倩;郭現(xiàn)超;傅詠;胡玉剛;李天成;張建光
• 申請（專利權）人: 北京貝瑞和康生物技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 孟凡宏;謝燕軍

1.一種無創(chuàng)檢測胎兒耳聾致病基因突變的方法，包括以下步驟：

a)針對耳聾致病基因預定位點的突變設計引物；

b)提取孕婦的血漿DNA；

c)將所述提取的血漿DNA與預擴增接頭連接，獲得連接產(chǎn)物；

d)對所述連接產(chǎn)物進行PCR預擴增，獲得預擴增產(chǎn)物；

e)對所述預擴增產(chǎn)物進行環(huán)化，獲得環(huán)化DNA分子；

f)利用所述引物對所述環(huán)化DNA分子進行PCR擴增，獲得擴增產(chǎn)物；和

g)對所述擴增產(chǎn)物進行高通量測序并分析耳聾致病基因的突變。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述預定位點的突變選自GJB2基因、GJB3基因和SLC26A4基因的22個位點的至少一種基因的突變。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述引物是一對背靠背的引物對。

4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述背靠背的引物對針對GJB2外顯子2、GJB3外顯子2、SLC26A4外顯子3、SLC26A4外顯子5、SLC26A4外顯子7、SLC26A4內含子7、SLC26A4外顯子8、SLC26A4外顯子10、SLC26A4外顯子17或SLC26A4外顯子19而設計。

5.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述背靠背引物對由一組疾病檢測點(即高頻突變點)附近的背靠背引物組成。

6.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述背靠背引物對帶有適用于不同高通量測序平臺的通用引物區(qū)。

7.根據(jù)權利要求3-6任一項所述的方法，其特征在于，所述背靠背引物對的序列分別為：

GJB2-F1(SEQIDNO：2)：CACGCTGCAGACGATCC

GJB2-R1(SEQIDNO：3)：CCCCAATCCATCTTCTACTCT

GJB2-F2(SEQIDNO：4)：TCCCACATCCGGCTATG

GJB2-R2(SEQIDNO：5)：GATGGGGAAGTAGTGATCGTAG

GJB3-F(SEQIDNO：7)：CGTGGACTGCTACATTGCC

GJB3-R(SEQIDNO：8)：ATGTTGGGGCAGGGG

PDS3-F(SEQIDNO：10)：CGTCATTTCGGGAGT

PDS3-R(SEQIDNO：11)：CTAAGCAGCCATTCC

PDS5-F(SEQIDNO：13)：CCCTGACTCTGCTGG

PDS5-R(SEQIDNO：14)：CACTGGCAATCAGGA

PDS7-F2(SEQIDNO：16)：TGGCAGTAGCAATTATCGTC

PDS7-R2(SEQIDNO：17)：TTTCATATGGAGCCAACCTG

PDS10-F(SEQIDNO：19)：CCACTGCTCTTTCCCGC

PDS10-R(SEQIDNO：20)：CAAGAGAAGAATCCTGAGAAGATG

PDS17-F(SEQIDNO：22)：TTCCTGGACGTTGTTGGAG

PDS17-R(SEQIDNO：23)：GATATAGCTCCACAGTCAAGCAC

PDS19-F(SEQIDNO：25)：TCTTGAGATTTCACTTGGTT

PDS19-R(SEQIDNO：26)：GTTCCATTTTAGAAACGGTA。

8.根據(jù)權利要求3-6任一項所述的方法，其特征在于，所述背靠背引物對中的一對引物檢測一個或多個位點。

9.根據(jù)權利要求2所述的方法，其特征在于，所述GJB2基因、GJB3基因和SLC26A4基因的22個位點的檢測利用9對引物的一次PCR完成。

10.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述接頭為barcode(多序列標記)接頭。

11.根據(jù)權利要求10所述的方法，其特征在于，所述接頭之間至少有兩個堿基差異。

12.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述接頭是部分配對的Y型接頭。