[發明專利]檢測化妝品中常見致病菌的基因芯片和試劑盒

有效

• 申請號: 201410174089.3
• 申請日: 2014-04-29
• 公開（公告）號: CN103937897A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 王磊;曹勃陽;陳敏;徐洋洋;馮露
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12Q1/10;C12Q1/04;C40B40/06
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明涉及一種基因芯片和檢測用試劑盒，尤其涉及檢測化妝品中常見致病菌的基因芯片和試劑盒。

背景技術

最近幾年以來，為了滿足消費者的需求，化妝品生產商在提高功效和回歸大自然的同時，在化妝品中加入了來自植物、動物中的營養成分，另外化妝品中還含有氨基酸、蛋白質、脂肪、維生素、無機鹽和胎盤液等營養成分，為細菌、真菌等各種致病菌的生長、繁殖提供了足夠的營養成分，因此化妝品特別容易受到微生物的污染。除此之外、pH?4-7也是微生物生長最適宜的條件，另外，化妝品在生產、儲存和日常使用過程中都是室溫放置，室溫也是微生滋生和繁殖的適宜溫度。微生物的生長需要水分，它是決定微生物能否生長和生長快慢的重要因素。微生物細胞的主要成分就是碳源，微生物細胞內的核酸和蛋白質的重要位置是氮源，另外微生物的生長還需要礦物元素，包括鉀、磷、鈉、鎂、鐵等成分，另外微生物所需的生長因子都是維生素類，在化妝品中含量豐富。因此化妝品里含的營養為微生物生長提供了一切條件，就是微生物生長的搖床。

妝品中受到污染以后，會發生各種變質現象，影響化妝品的質量。微生物新陳代謝后分泌色素，比如霉菌代謝產生的色素，可以是化妝品變成黑色、黃色產生霉斑等各種顏色。另外微生物代謝有時產生的硫物質，胺物質等會發出酸臭味，使原本芬芳的氣味發出難聞的氣味。另外，微生物污染化妝品生長過程中，分解蛋白質、氨基酸、酶類等，是化妝品的理化結構發生變化，腐敗變質不能使用。如果污染的微生物是致病菌，在使用的過程中，還會感染消費者，嚴重危害身體健康。致病菌生長過程中會產生代謝產物和各種毒素，這些產物在人體免疫系統的識別下，可以變成刺激源和變應原，使使用者產生過敏或者受到感染，引起各種各樣的皮膚病，比如膚色異常、接觸性和光感性皮炎，掉頭發，頭發粗糙，痤瘡等皮膚病。

根據文獻參考以及調查，我們選取了12種化妝品中常見的致病菌，包括白色念珠菌（Candida?albicans），新生隱球菌（Cryptococcus?neoformans），志賀氏菌（Shigella），藤黃微球菌（Micrococcus?luteus），金黃色葡萄球菌（Staphylococcus?aureus），化膿鏈球菌（Streptococcus?pyogenes），沙門氏菌（Salmonella），奇異變形桿菌（Proteus?mirabilis），弗氏檸檬酸桿菌（Citrobacter?freundii），銅綠假單胞菌（Pseudomonas?aeruginosa），產氣腸桿菌（Enterobacter?aerogenes），斯氏普羅威登斯菌（Providencia?stuarti）。

化妝品經過一次污染和二次污染，致病菌就會進入到化妝品中，而且化妝品為微生物的生長提供了足夠的營養和水分，是微生物生長的溫床。污染化妝品的微生物主要包括真菌和細菌，一般霉菌不致病，細菌主要是大腸桿菌群，金黃色葡萄球菌，銅綠假單胞菌等。被污染的化妝品就會引起消費者面部器官、皮膚的感染，更嚴重的引起全身感染，致病菌通過皮膚的破損處或者口腔進入到人體內。傳統的病原菌鑒定主要是生化鑒定和血清型分型，這些方法可以很準確的鑒定微生物，但是操作時間太長，操作也比較復雜，需要耗費大量的人力和物力。隨著技術的發展，也有一些新的技術涌現，包括實時定量聚合酶鏈反應、限制性片段長度多態性分析、單鏈構象多態性分析、熒光原位雜交、質譜技術、免疫技術等，這些方法與傳統方法比，操作更簡單，更快速。

（1）實時定量聚合酶鏈反應

實時熒光定量PCR?(?real-time?fluorescentquantitative?polymerase?chain?reaction)，就是在簡單的PCR反應過程中加入熒光染料或者熒光探針，利用PCR過程中熒光的變化量，用機器實時監測PCR中產物的擴增量，實現定量的目的。Richardson等人就利用熒光定量PCR技術了鑒定了314株分枝桿菌菌株，靈敏度可以高達95%以上，這位臨床治療結核病奠定了基礎。與傳統方法比較發現，實時熒光定量PCR的重復性比較好，靈敏度比較高，特異性也比較高。而且PCR擴增過程中就可以完成分析，避免了外界的污染。整個過程比較快，從提取模板到結果分析，只需要8個小時左右。但是它也有缺點，檢測比較單一，實際樣品中致病菌的種類繁多，所以實時熒光定量PCR還有局限性。

（2）限制性片段長度多態性分析