[發明專利]一種檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒

有效

• 申請號: 201410174030.4
• 申請日: 2014-04-28
• 公開（公告）號: CN103941020A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 岳華;湯承;張斌;王遠微;張煥容
• 申請（專利權）人: 西南民族大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，其特征在于：該試劑盒是將副豬嗜血桿菌的細胞致死性膨脹毒素(Cytolethal?distending?toxin，CDT)?C蛋白作為包被抗原；判斷標準為：S/P值=（待測樣本OD450nm均值-陰性對照OD450nm均值）/（陽性樣本OD450nm均值-陰性對照OD450nm均值）<0.200，判為陰性，≥0.200，判為陽性。

2.根據權利要求1所述檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，其特點在于：包被抗原副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

3.根據權利要求2所述檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，其特點在于：包被抗原副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白是通過基因工程方法表達得到，具體如下：

將核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2?所示的副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白核苷酸序列克隆于大腸桿菌表達載體pcold-sumo中，得到pcold-sumo+CDTC質粒。

4.根據表達載體pcold-sumo的操作說明，將pcold-sumo+CDTC質粒轉化到大腸桿菌BL21(DE3)PlysS感受態細胞，進行表達、鑒定、純化，得到副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白。

5.根據權利要求3所述檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，其特點在于：所述的步驟（2）為：將攜帶pcold-sumo+CDTC質粒的大腸桿菌BL21(DE3)PlysS接種于含有氨芐的LB液體培養基中，在37℃環境下振蕩培養，待菌液的OD₆₀₀吸光值達到0.6是加入0.5mM的IPTG，在搖床中16℃誘導24h進行表達，收集菌體反復凍融3次后超聲破碎300W，工作5s，間隔10s，70次，破碎菌液用HIS標簽的純化柱進行純化，純化后通過尿素進行透析復性，獲得副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白。

6.根據權利要求1所述檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，其特點在于：所述試劑盒中副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白的最佳包被濃度為5μg/mL。

7.實現權利要求1-5任一項所述檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA試劑盒，包含待檢樣品稀釋板、陽性對照血清、陰性對照血清、濃縮洗滌液、血清樣本稀釋液、酶標抗體工作液、顯色液和終止液，其特征在于：所用的包被抗原為副豬嗜血桿菌CDT-C蛋白。