[發(fā)明專利]免疫膠體金滲濾法定量檢測生物樣品中抗原性物質的方法和試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410172350.6
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN105021810A
• 公開（公告）日: 2015-11-04
• 發(fā)明（設計）人: 謝福文
• 申請（專利權）人: 杭州慧緣泰醫(yī)療器械有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/68
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 陳文平;徐志明

本發(fā)明的技術領域

本發(fā)明涉及生物化學和光電檢測領域，更特別地涉及一種利用免疫膠體金滲濾法定量檢測生物樣品中抗原性物質的方法及試劑盒。

本發(fā)明的背景技術

膠體金免疫層析技術和膠體金免疫滲濾技術是近代醫(yī)學檢驗史上革命性技術，基于這兩種技術開發(fā)的產(chǎn)品如早孕檢測試紙條，各種病毒檢測試紙條，毒品檢測試紙條等，已廣泛應用于臨床醫(yī)學檢驗。這些試紙條具有快速、簡易、方便等優(yōu)勢，使得床邊醫(yī)學檢驗成為可能。但這些試紙條最大的缺陷就是只能進行定性檢測而不能定量，因此，這些產(chǎn)品只能起到初篩的作用。如果能進行準確定量，則這些產(chǎn)品不僅可以幫助診斷，而且還可以幫助療效的確定和預后的判斷(曹丹如，陳悅，劉德琮等，快速檢測血清HCG的半定量金免疫滲濾法的建立.檢驗醫(yī)學，2008，23(1)：8-10；邵強，王俊華，雙抗體夾心ELISA法測定殘余漢遜酵母菌體蛋白含量的研究.四川動物，2008，27(5)：945-946)。

C-反應蛋白(C-reactive?protein)是炎性淋巴因子白介素-6、白介素-1、腫瘤壞死因子刺激肝臟上皮細胞合成的。由各種原因引起的組織損傷都會導致血清中C-反應蛋白濃度的升高，同時還會出現(xiàn)一系列的全身性反應，包括發(fā)熱、免疫反應增強等急性時相反應。C-反應蛋白水平的高低與炎癥的出現(xiàn)及其嚴重程度具有線性相關性，因而被公認為是最有價值的急性時相反應蛋白，且它的升高可以提示許多炎癥性疾病的發(fā)生。

國內(nèi)外現(xiàn)有檢測C-反應蛋白的方法有金標層析法、金標滲濾法、免疫濁度法。參見例如，張曉慧、李光韜和張卓莉，C-反應蛋白與超敏C-反應蛋白的檢測及其臨床意義，中華臨床免疫和變態(tài)反應雜志.2011，01：80-85；楊世峰，尹愛萍.C-反應蛋白與糖尿病腎病的研究進展.醫(yī)學綜述.2008，03：118-120；韓鋒產(chǎn)，閻小君，侯瑜等.膠體金免疫層析法檢測抗幽門螺桿菌細胞毒素相關蛋白A抗體.世界華人消化雜志.1999，9(7)；鄧艷琴，嚴延生，何似等.應用快速免疫層析法檢測恙蟲病特異性IgM、IgG及總抗體.中國人獸共患病雜，2003，06：53-55；趙海峰，甘一如.膠體金免疫層析法檢測小分子物質.農(nóng)藥，2007，46(7)：439-446；朱明東，徐衛(wèi)民，洪林娣等.斑點金免疫滲濾法快速診斷布魯桿菌病的研究.中國地方病學雜志，2006，25(3)：326-327；楊溢，陳其云，楊揚.免疫比濁法測定血清C-反應蛋白(C-反應蛋白)的評價.四川省衛(wèi)生管理干部學院學報，2003，03：9-10。

南京普朗醫(yī)療使用金標層析法檢測C-反應蛋白，其通過使用配套儀器免疫定量分析儀FIA8000，可以達到定量或非定量檢測人血液中高敏C-反應蛋白的目的。該系統(tǒng)的使用不需要抗凝劑，可以檢測濃度在0.5～64mg/L范圍內(nèi)的血清或者血漿樣品，但是無法檢測全血。另外，其可以儲存10000個血清樣本的檢測值。檢測一個血清樣本操作過程需要的時間是7分鐘，并且待檢時間嚴格控制在7分鐘。當濃度＜20mg/L時CV＜15％，而當濃度＞20mg/L時CV≥20％。

芬蘭Orion公司使用免疫比濁法檢測C-反應蛋白。其通過使用配套儀器QuikRead/第二代POCT產(chǎn)品，可以定量測試血液中的C-反應蛋白，但是不能用于低濃度C-反應蛋白的定量檢測，例如新生兒診斷或心血管疾病危險分級。該系統(tǒng)使用EDTA或肝素作為抗凝劑，可以檢測濃度在8-160mg/L范圍內(nèi)的全血，但無法儲存檢測值。檢測一個全血樣本的操作過程需要的時間是4分鐘，并且待檢時間嚴格控制在4分鐘。在檢測8mg/L濃度時，CV＜15％(李亞，李忠，何曉明.超敏C-反應蛋白檢測的臨床應用.熱帶醫(yī)學雜志，2007，08：85-86；王偉，何瑩，韓起等.超敏C-反應蛋白單克隆抗體制備及其ELISA體系的初步建立.免疫學雜志，2013，08：59-63)。

挪威Axis-Shield公司使用金標滲濾法檢測C-反應蛋白。其通過使用配套儀器Nycocard/第二代POCT產(chǎn)品，可以定量測試血液中的C-反應蛋白，但是不能用于低濃度C-反應蛋白的定量檢測，例如新生兒診斷或心血管疾病危險分級。該系統(tǒng)使用EDTA、肝素或枸櫞酸鹽作為抗凝劑，可以檢測濃度在8-250mg/L范圍內(nèi)的全血樣品，但無法儲存檢測值。檢測一個全血樣本操作過程需要的時間是4分鐘，并且待檢時間需要嚴格控制在5分鐘內(nèi)，其量程范圍內(nèi)的CV≤5％(龍建國，張會峰，鄭運周等.D-二聚體異常結果臨床疾病的調查分析.醫(yī)學理論與實踐，2010，07：104-105)。