[發(fā)明專利]一種雙功能標(biāo)記物構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410171321.8
• 申請日: 2014-04-26
• 公開（公告）號: CN103913565A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 魏琴;張森;杜斌;龐雪輝;馬洪敏;吳丹
• 申請（專利權(quán)）人: 濟(jì)南大學(xué)
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N27/30;G01N27/48
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1.一種雙功能標(biāo)記物-二抗孵化物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）二氧化鈦納米材料的制備

將2?mL鈦酸丁酯加入40~50?mL乙二醇中，室溫?cái)嚢?~8?h制成混合物，將混合物加入150~170?mL的丙酮中，加2~3?mL水，劇烈攪拌1~2?h，離心分離，用乙醇清洗2~4?次，50℃干燥，制得二氧化鈦前驅(qū)體；將0.1?g二氧化鈦前驅(qū)體分散到20?mL水中，攪拌條件下加熱回流1~2?h；再經(jīng)過離心分離，乙醇清洗2~4?次，50℃干燥，制得二氧化鈦納米材料，備用；

（2）銅摻雜二氧化鈦Cu@TiO₂的制備

將1?g?二氧化鈦納米材料加到40?mL、10?mol·L^-1?的NaOH溶液中，攪拌2~3?h，裝入聚四氟乙烯的反應(yīng)釜中，?120~140℃加熱18?~?24?h，取出、冷卻至室溫，用8~12?mL、0.1?mol·L^-1?HCl溶液攪拌處理，超純水洗滌至中性，60℃下干燥，得到處理過的二氧化鈦納米材料；

將乙二胺（en）和Cu(OH)₂以化學(xué)計(jì)量比2:1的比例混合制得Cu(en)₂(OH)₂溶液，將0.8?g上述處理過的二氧化鈦納米材料加到50?mL?制得的Cu(en)₂(OH)₂溶液中，攪拌1~2?h，得到藍(lán)色物質(zhì)，離心分離，用水清洗數(shù)次后，在400~500℃下煅燒得到黃色粉末銅摻雜二氧化鈦Cu@TiO₂；

（3）雙功能標(biāo)記物的制備

將0.25?g?Cu@TiO₂、0.5?mL?3-氨丙基三乙氧基硅烷、80?mL甲苯，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，120℃攪拌回流4~6?h，用甲苯和超純水各清洗2~4次，50~60℃下干燥，制得氨基功能化銅摻雜二氧化鈦Cu@TiO₂，即雙功能標(biāo)記物；

所述的雙功能標(biāo)記物，其功能一是利用二氧化鈦上的銅離子發(fā)生氧化還原反應(yīng)產(chǎn)生的信號用方波伏安法對分析物進(jìn)行檢測；二是利用二氧化鈦上的銅離子催化H₂O₂產(chǎn)生的信號，采用計(jì)時(shí)電流法對分析物進(jìn)行檢測；

（4）雙功能標(biāo)記物-二抗孵化物Cu@TiO₂-Ab₂的制備

將1?mg雙功能標(biāo)記物和0.5?mL、質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.5%的戊二醛混合，振蕩1~2?h，離心，傾倒上層溶液，加入0.4~0.6?mL、pH7.0~7.8的PBS溶液，超聲使其分散均勻；加入3~5?μL分析物的二抗（Ab₂），振蕩10~12?h后離心分離，用pH?7.0~7.8的PBS溶液定容至1?mL，制得雙功能標(biāo)記物-二抗孵化物Cu@TiO₂-Ab₂，置于4℃冰箱中備用。

2.一種雙功能標(biāo)記物構(gòu)建的免疫傳感器的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）將3~5?μL、1.5~2.5?mg·mL^-1超聲處理分散均勻的石墨烯，滴涂在玻碳工作電極表面，自然晾干；

（2）分別將3~5?μL的8~12?μg·mL^-1?分析物的一抗Ab₁滴涂在（1）中得到的工作電極表面，?4℃冰箱中干燥；

（3）滴涂2~4?μL、80~120?μg·mL^-1的牛血清白蛋白于（2）中得到的工作電極表面，置于4℃冰箱中直至干燥，超純水清洗后，置于4℃冰箱中晾干；

（4）取3~5?μL權(quán)利要求1制備的雙功能標(biāo)記物-二抗孵化物Cu@TiO₂-Ab₂，滴涂于電極表面上，置于4?℃冰箱中晾干，制得一種雙功能標(biāo)記物構(gòu)建的免疫傳感器。