[發(fā)明專利]利用穿心蓮和阿米卡星治療畜禽大腸桿菌感染疾病的方法

在審

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• 申請日: 2014-04-25
• 公開（公告）號: CN103933087A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設計）人: 司紅彬;夏娟;王秋華;蔣利和;劉增援;宋劍武;徐素萍;潘婕;鄭艷青
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: A61K36/19
• 分類號: A61K36/19;A61P31/04;A61K31/7036
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 韋錦捷

技術領域

本發(fā)明屬于畜禽大腸桿菌感染治療技術領域，尤其涉及一種利用穿心蓮和阿米卡星治療畜禽大腸桿菌感染疾病的方法。

背景技術

大腸桿菌是常見的條件致病菌，也是常發(fā)的一種疾病，它可原發(fā)引起雞急性敗血癥、腹膜炎、肝炎、肺炎、腸炎等多部位嚴重感染，亦可繼發(fā)或混發(fā)于病毒病，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。阿莫西林、氨芐西林、頭孢噻呋、頭孢曲松、阿莫西林/克拉維酸、氨芐西林/舒巴坦等β-內酰胺環(huán)類抗生素是防治該病的常用的重要藥物，隨著養(yǎng)殖規(guī)模集約化程度愈來愈大，用藥愈來愈泛濫，其耐藥菌株愈來愈多，關于大腸桿菌耐藥性的報道也較多。研究證實，耐藥的主要機制之一是產生β-內酰胺酶，尤其是超廣譜β-內酰胺酶(Extended-Spectrumβ-lactamase，ESBLs)，該酶能較強和快速地水解β-內酰胺環(huán)，使這類抗生素喪失抗菌活性。ESBLs是β-內酰胺酶的最主要酶型，它不僅對頭孢三代和氨曲南耐藥，而且對氨基糖苷類、喹諾酮類和磺胺類呈交叉耐藥，僅對碳青霉烯類、頭霉烯類藥物敏感。許多文獻已經(jīng)報道大腸桿菌的多重耐藥性與產生ESBLs有密切關系，國內外對之較為關注。發(fā)明人最近開展了食品動物源致病菌ESBLs的檢測、提取、酶對抗生素的水解率及舒巴坦、他唑巴坦以及中藥的抑酶保護作用等研究，對部分ESBLs大腸桿菌的藥敏試驗表明，其多重耐藥率明顯高于非ESBLs菌株。另外，結果還表明產ESBLs菌株不僅對頭孢噻呋等第三代頭孢菌素嚴重耐藥，而且亦對氟喹諾酮類、氨基糖苷類和磺胺類、磷霉素等多種抗菌藥耐藥，呈嚴重的多重耐藥。發(fā)明人在產ESBLs菌株中分離到耐磷霉素產fosA3耐藥基因的大腸桿菌，更加強了細菌的耐藥性。大腸桿菌的耐藥性造成養(yǎng)殖戶用藥成本增加，治療療程延長，畜禽死亡率增加，給生產帶來較大經(jīng)濟損失，并且增加畜禽藥物殘留風險。因此，實際生產中亟需一種對無論是否耐藥的大腸桿菌都能有較好治療作用的方法，并能縮短治療療程，減少死亡率，降低經(jīng)濟損失且降低藥物殘留，為養(yǎng)殖戶創(chuàng)造更高的經(jīng)濟效益，也保障人類的健康安全。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種利用穿心蓮和阿米卡星治療畜禽大腸桿菌感染疾病的方法，它能夠較快地殺死細菌，克服抗菌藥治療由于耐藥性問題造成的療效差、用量大、殘留高和成本高的缺陷，避免了單純中藥殺菌譜窄、殺菌慢的問題。

為解決以上技術問題，本發(fā)明采用以下技術方案：一種利用穿心蓮和阿米卡星治療畜禽大腸桿菌感染疾病的方法，將穿心蓮與阿米卡星按照10-160：7-30的重量比例混合，得到含穿心蓮的復方藥物，將該復方藥物按照0.1-7g/kg飼料的添加量添加到畜禽飼料中進行飼喂，連續(xù)使用3-7天。

所述的復方藥物制備成散劑、片劑、口服液或顆粒劑。

所述的復方藥物的制備方法為：將穿心蓮粉碎過60目篩，再與粉末狀的抗菌藥混勻，按常規(guī)方法制備成散劑、片劑、口服液或顆粒劑。

針對目前畜禽大腸桿菌感染存在的耐藥性問題，發(fā)明人利用廣西特色中藥穿心蓮與抗菌藥組成復方藥物。研究證明，抗菌藥中加入穿心蓮后，能夠逆轉細菌對抗菌藥的耐藥性，從而提高抗菌藥的治療效果。按常規(guī)方法將該復方藥物制成散劑、片劑、口服液或顆粒劑，按照0.1-7g主藥/kg飼料的添加量添加到畜禽飼料中進行飼喂，可大幅降低用藥成本和藥物殘留，為養(yǎng)殖戶創(chuàng)造更高的經(jīng)濟效益，同時也確保了食品安全。

具體實施方式

一、穿心蓮對抗菌藥的耐藥逆轉作用研究

抗菌藥本身具有治療大腸桿菌的效果，但由于產ESBLs耐藥基因的大腸桿菌具有較強的耐藥性，致使抗菌藥在正常的使用劑量情況下并未表現(xiàn)出較好的治療效果。

為了驗證穿心蓮對抗菌藥的耐藥逆轉作用，在96孔板上采用微量試管二倍稀釋法，先測定了抗菌藥對產ESBLs和fosA3耐藥基因的大腸桿菌株的最小抑菌濃度和穿心蓮對產ESBLs和fosA3耐藥基因大腸桿菌株的亞抑菌濃度，然后在培養(yǎng)基中加入亞抑菌濃度的穿心蓮再次使用微量試管二倍稀釋法培養(yǎng)測定抗菌藥的最小抑菌濃度；利用連續(xù)傳代法在加有同樣亞抑菌濃度穿心蓮和同樣濃度抗菌藥的培養(yǎng)基中對產ESBLs和fosA3耐藥基因大腸桿菌株進行傳代培養(yǎng)，直至觀測到的抗菌藥最小抑菌濃度與傳代前相比變小4倍以上，即可判斷為穿心蓮對抗菌藥具有耐藥逆轉作用。試驗結果統(tǒng)計如表1所示：

表1亞抑菌濃度(0.25g/mL)穿心蓮傳代引起產ESBLs和fosA3大腸桿菌西藥MIC的變化(mg/mL)。