[發明專利]EVs-TRPC5在檢測乳腺癌耐藥程度中的應用

有效

• 申請號: 201410170932.0
• 申請日: 2014-04-25
• 公開（公告）號: CN103954770A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 馬鑫;金堅;汪淋軍;陳震;陳蘊;蔡燕飛
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;C12Q1/68
• 代理公司: 無錫華源專利事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 聶漢欽

技術領域

本發明涉及TRPC5的一種新用途，尤其是涉及細胞外囊泡（EVs）的瞬時受體電位通道（TRPC5）在檢測乳腺癌耐藥程度中的應用。

背景技術

乳腺癌是女性常見的癌癥，嚴重威脅女性身心健康。中國抗癌協會公布的最

新統計數字顯示，從20世紀90年代以來，乳腺癌發病率和死亡率均持續穩定上升，發病率以每年4.476%的速度增長，死亡率以每年3%的速度增長。化學藥物治療是乳腺癌的主要治療手段之一，目前臨床常用藥物有：（i）蒽環類，紫杉類，抗代謝類，抗微管類，烷化劑，雜類等；（ii）抗雌激素，芳香化酶抑制劑等；（iii）曲妥珠單抗（抗Her-2）、貝伐單抗（抗VEGF）。

但是，據美國癌癥協會報道，90%以上腫瘤患者死于不同程度的化療耐藥。對化療藥物產生耐藥已經成為腫瘤治療的一大難題。經過近幾十年的研究，目前發現的耐藥機制有（1）細胞膜ABC藥物轉運蛋白表達增強，減少藥物攝入及增加藥物排出，P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）是目前研究最多也是最為重要的ABC藥物轉運蛋白，由多藥耐藥基因mdr1編碼；（2）通過使藥物發生異化降低藥物活性，常見的酶有GST、CYP450等；（3）藥物作用靶點突變或表達水平變化等；（4）腫瘤異質性；（5）腫瘤干細胞耐藥等。

目前，早期診斷腫瘤的最新、最有效的方法是通過驗血尋找腫瘤標記物。腫瘤標志物指的是在腫瘤發生、發展的過程中，能反應細胞癌變的一些細胞內物質。臨床上通過對各種腫瘤標志物的檢測，可以對相應腫瘤做早期診斷、檢測療效和腫瘤復發狀況。因此，在深入研究耐藥機制的基礎上，開發乳腺癌耐藥分子診斷指標、方法，實現試劑化，達到耐藥早期、動態監測，在現階段對于乳腺癌耐藥的診療至關重要，也為優化藥物結構設計、研發耐藥逆轉藥物提供有益借鑒，因而具有重大而現實的社會價值。

MUC1是一種粘蛋白，在正常細胞表達時是一種跨膜糖蛋白，正常情況下，在乳腺、胃腸道及泌尿生殖道的上皮細胞頂端表達，糖基化完全。MUC1度正常上皮起潤滑和保護作用、介導信號轉導和細胞黏附。

在乳腺癌細胞株MCF-7中通過磷酸化，MUC1能結合Rrb/SOS，參與受體酪氨酸激酶介導的信號轉導，而酪氨酸磷酸化是膜受體參與信號轉導的一個關鍵步驟。乳腺癌MUC1的表達特點包括：高表達、異常表達低；糖基化、高唾液酸化；頂端定為不清，極性混亂；細胞漿和細胞表面都有過度表達，并且這些分子會從乳腺癌細胞進入血清。有研究者檢測基底樣乳腺癌患者，發現高表達MUC1，大約有92%的患者能檢測出過表達的MUC1。

TRPC5是瞬時受體電位通道（transient?receptor?potential?channels，TRP通道）家族的一個亞型，它是細胞膜上能通透鈣離子的非選擇性通道，主要分布于腦、肺、睪丸和胎盤，并主要參與生長錐的形成和腦的發育。本研究室研究發現，瞬時受體電位通道TRPC5與腫瘤多藥耐藥密切相關，TRPC5在耐阿霉素的乳腺癌細胞（MCF-7/ADM）中發生明顯上調，并能間接介導腫瘤產生多藥耐藥的P-gp蛋白在多藥耐藥腫瘤細胞（如MCF-7/ADM）中的表達水平。本申請人針對該性質申請了相關專利，專利名稱為《TRPC5作為藥物靶點在逆轉腫瘤多藥耐藥中的應用》（專利號：201210318389.5）。

細胞外囊泡（extracellular?vesicles，EVs）是指細胞外環境含有大量可移動的細胞膜來源的囊泡。這些EVs主要包括外來體exosomes、微泡microvesicles以及凋亡小體apoptotic?bodies，這些動態的EVs在細胞間交流和免疫調節過程中起著至關重要的作用。脂筏標記蛋白flotillin-2在EVs上特異表達，可作為特異性標志物應用于研究過程中。腫瘤細胞也產生EVs，研究者在惡性膠質瘤、胰腺癌、胃癌和急性白血病病人的血液中發現都有大量的EVs存在。這些EVs中包含有細胞表面蛋白、RNA及DNA，通過EVs將囊泡內容物由供體細胞向受體細胞轉運，從而介導細胞間交流，進而引發腫瘤的遷移和侵襲，然而這些EVs結構的形成原因及其與乳腺癌化療耐藥的相關性還有待進一步研究。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本申請人提供了一種EVs-TRPC5在檢測乳腺癌耐藥程度中的應用。本發明根據血液EVs中TRPC5的表達的高低，可顯示出乳腺癌腫瘤細胞耐藥轉變的情況，具有檢測方法簡單、速度快、靈敏度高、成本低的優點。

本發明的技術方案如下：