[發明專利]一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法

無效

• 申請號: 201410168664.9
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN103948920A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 吳金;張中洋;任培森;李秋菊;姜翠翠;高玉龍;許明會
• 申請（專利權）人: 吉林和元生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/245
• 分類號: A61K39/245;C12N7/02;A61P31/22
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所 44268
• 代理人: 王永文;楊宏

技術領域

本發明涉及一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法。

背景技術

目前我國生產豬偽狂犬病活疫苗主要用雞胚成纖維細胞生產，此方法成本高，毒價低、勞動強度大。同時因各個轉瓶都是獨立單元，每瓶的細胞質量、病毒滴度均不相同，致使生產出的疫苗質量不穩定、批量差異大。因此，現有技術還有待于更進一步的改進和發展。

發明內容

鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法，以實現制備出的豬偽狂犬病活疫苗質量均一、成本低廉，且疫苗安全性好、免疫效力高。

本發明的技術方案如下：

一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法，其包括以下步驟：

A、對豬睪丸細胞系或倉鼠腎細胞系進行細胞的復蘇、傳代與培養的步驟；

B、然后在步驟A處理后的豬睪丸細胞系或倉鼠腎細胞系進行毒種繁殖、毒液繁殖的步驟；

C、制備疫苗穩定劑，然后按照細胞毒液與疫苗穩定劑7:1的比例進行定量分裝，每頭份病毒含量不低于10⁶TCID₅₀，分裝后迅速進行冷凍真空干燥，得到豬偽狂犬病活疫苗。

所述的制備方法，其中，所述步驟A具體的包括：先用方瓶培養從液氮中復蘇的豬睪丸細胞系或倉鼠腎細胞系，待其長成單層后經胰酶消化傳代，加入細胞生長液繼續培養，形成單層的細胞繼續傳代培養或接種病毒。

所述的制備方法，其中，所述步驟B具體的包括：取形成良好單層的細胞系培養瓶，棄去細胞生長液，接種含豬偽狂犬病毒的細胞維持液，繼續培養；當病變細胞達到75％以上時，獲得豬偽狂犬病毒種。

所述的制備方法，其中，所述步驟B具體的還包括：取形成良好單層的細胞系培養瓶，棄去細胞生長液，接種含豬偽狂犬病毒的維持液，繼續培養；當CPE達到75％以上時，獲得豬偽狂犬病毒液，將收獲的獲得豬偽狂犬病毒種置-20℃以下保存。

所述的制備方法，其中，所述步驟B具體的還包括：病毒的接種量為含0.5-1％的生產用細胞毒。

所述的制備方法，其中，細胞生長液的配方是：92％-95％的MEM液與5％-8％的犢牛血清，Ph值調整為7.2-7.4。

所述的制備方法，其中，細胞維持液的配方是：97％-98％的MEM液與2％-3％的犢牛血清，Ph值調整為7.3-7.5。

本發明提供的一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法，采用復蘇、傳代、培養、毒種繁殖、毒液繁殖與滅活分裝的步驟，用細胞系代替雞胚成纖維細胞生產豬偽狂犬病活疫苗，可以從源頭控制外源污染，保證了生產豬偽狂犬病活疫苗的安全性，使其抗原滴度高，大幅度提高了疫苗的免疫能力，可達到100％的保護，并且本發明操作簡單、工藝穩定、病毒含量高、質量易控等優點，可顯著提高疫苗產量和質量，利用本發明生產的豬偽狂犬病活疫苗安全性好、免疫效力高，而且原料成本低，適合規?；a，具有廣闊的市場前景。

具體實施方式

本發明提供了一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法，為使本發明的目的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。

本發明提供了一種豬偽狂犬病活疫苗的制備方法，其包括以下步驟：

步驟101：對豬睪丸細胞系或倉鼠腎細胞系進行細胞的復蘇、傳代與培養的步驟；

步驟102：然后在步驟101處理后的豬睪丸細胞系或倉鼠腎細胞系進行毒種繁殖、毒液繁殖的步驟；

步驟103：制備疫苗穩定劑，然后按照細胞毒液與疫苗穩定劑7:1的比例進行定量分裝，每頭份病毒含量不低于10⁶TCID₅₀，分裝后迅速進行冷凍真空干燥，得到豬偽狂犬病活疫苗。

更進一步的，所述步驟101具體的包括：先用方瓶培養從液氮中復蘇的豬睪丸細胞系或倉鼠腎細胞系，待其長成單層后經胰酶消化傳代，加入細胞生長液繼續培養，形成單層的細胞繼續傳代培養或接種病毒。

在本發明的另一較佳實施例中，所述步驟102具體的包括：取形成良好單層的細胞系培養瓶，棄去細胞生長液，接種含豬偽狂犬病毒的細胞維持液，繼續培養；當病變細胞達到75％以上時，獲得豬偽狂犬病毒種。而且還取形成良好單層的細胞系培養瓶，棄去細胞生長液，接種含豬偽狂犬病毒的維持液，繼續培養；當CPE達到75％以上時，獲得豬偽狂犬病毒液，將收獲的獲得豬偽狂犬病毒種置-20℃以下保存。