[發明專利]黃瓜葉色突變基因v-1的SSR標記及其應用有效
| 申請號： | 201410168519.0 | 申請日： | 2014-04-24 |
| 公開（公告）號： | CN103937788A | 公開（公告）日： | 2014-07-23 |
| 發明（設計）人： | 苗晗;顧興芳;張圣平;王燁 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院蔬菜花卉研究所 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉誠知識產權代理有限公司 11129 | 代理人： | 吳泳歷 |
| 地址： | 100081 北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 黃瓜 突變 基因 ssr 標記 及其 應用 | ||
1.一種與黃瓜葉色突變基因v-1緊密連鎖的SSR標記，其引物的核苷酸序列如下：
SSR8v-1-F/SSR8v-1-R：GGCAATGGTAAAGGTTGGAA/AAGGGATGTGTGGTGTGGTT；
所述引物擴增的與葉色突變基因v-1連鎖的SSR標記特征條帶為194bp，核苷酸序列如Seq?ID?No.1所示；
所述引物擴增的與葉片綠色基因V-1連鎖的SSR標記特征條帶為206bp，核苷酸序列如Seq?ID?No.2所示。
2.權利要求1所述SSR標記在篩選具有葉色突變基因v-1的黃瓜種質資源中的應用，其步驟如下：
(1)采用所述SSR標記的引物對待選黃瓜品種的基因組DNA分別進行PCR擴增；
(2)對擴增結果進行凝膠電泳檢測；
(3)從檢測結果中選出與葉色突變基因v-1連鎖的SSR標記特征條帶一致的材料。
3.根據權利要求2或3所述的應用，所述PCR擴增的反應體系為:3μL?DNA(2.5ng·μL-1)，正向和反向引物(50ng·μL-1)各1μL，5μL?GoGreen?Master?Mix，加雙蒸水至10μL。
4.根據權利要求2或3所述的應用，所述PCR擴增的程序為：94℃預變性4min；94℃變性15s；55℃退火15s；72℃延伸30s；35個循環；72℃保溫5min；4℃保存。
5.根據權利要求2～4任一所述的應用，所述凝膠電泳檢測指采用8.0％的非變性聚丙烯酰胺凝膠，于160V恒功率電泳分離，最后銀染顯色。
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