[發明專利]分化無核細胞及其制備方法

在審

• 申請號: 201410168106.2
• 申請日: 2009-07-21
• 公開（公告）號: CN103937749A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 優素?！だ锓评?/a>;布賴恩·柯蒂斯·特納
• 申請（專利權）人: 泰加生物工藝學公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/0789;C12N5/078;A61K35/18;A61P7/06;A61P7/04;A61P7/00
• 代理公司: 北京律盟知識產權代理有限責任公司 11287
• 代理人: 章蕾

1.一種制備成熟紅細胞的方法，其包含：在誘導分化成紅細胞的試劑存在下培養條件永生化造血干細胞，其中所述試劑為IL-3和EPO；其中所述試劑將條件永生化造血干細胞誘導分化為成熟紅細胞；

其中通過以下來產生所述條件永生化造血干細胞：

a.使用第一核酸轉導多個造血干細胞，所述第一核酸包含編碼MYC分子的核酸序列；

b.使用第二核酸轉導所述造血干細胞，所述第二核酸包含編碼Bcl-2、Bcl-X或其組合的核酸序列；及

c.將所述造血干細胞與IL-3、IL-6、干細胞因子、血小板生成素、Flt3配體或其組合一起培養；

且其中在分化之前已抑制所述Myc分子的一種或多種活性，或已抑制Myc分子的存在。

2.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一核酸進一步包含人類雌激素受體的激素結合結構域。

3.根據權利要求1所述的方法，其進一步包含誘導所述Myc分子移位至細胞核。

4.根據權利要求1至3中任一權利要求所述的方法，其中所述第二核酸編碼Bcl-2。

5.一種產生成熟紅細胞的方法，其包含：在誘導分化成紅細胞的試劑存在下培養條件永生化造血干細胞，所述試劑為IL-3和EPO；其中所述試劑將條件永生化造血干細胞誘導分化為成熟紅細胞；

其中通過以下來產生所述條件永生化造血干細胞：

a.使多個造血干細胞與重組的第一肽接觸，所述第一肽包含移位至細胞核的MYC分子，所述第一肽具有MYC生物活性；

b.使所述造血干細胞與重組的第二肽接觸，所述第二肽包含Bcl-2、BCL-X或其組合，所述第二肽在所述細胞內具有抗凋亡功能；及

c.將所述造血干細胞與IL-3、IL-6、干細胞因子、血小板生成素、Flt3配體或其組合一起培養；

且其中在分化之前所述第一肽的活性或存在降低。

6.根據權利要求5所述的方法，其中所述第一肽、所述第二肽、或所述第一肽與所述第二肽二者包含轉運蛋白序列。

7.根據權利要求5或6所述的方法，其中所述第一肽、所述第二肽、或所述第一肽與所述第二肽二者包含TAT序列。

8.根據權利要求1至6中任一權利要求所述的方法，其中所述MYC分子是c-Myc、1-Myc、n-Myc、s-Myc或其組合。

9.根據權利要求5至7中任一權利要求所述的方法，其中所述第二肽是Bcl-2。

10.根據權利要求1至6中任一權利要求所述的方法，其進一步包含使所述造血干細胞與雌二醇(E2)、4-羥基他莫昔芬(4-hydroxytamoxifen)(4-OHT)或二者接觸。

11.根據權利要求1至6中任一權利要求所述的方法，其中所述造血干細胞進一步包含編碼目標多肽的核酸。

12.一種成熟的紅細胞，其由根據權利要求1至6中任一權利要求所述的方法所產生。

13.一種組合物，包括：根據權利要求12所述的成熟的紅細胞，所述組合物用于治療選自由以下組成的群組的病癥：表征為成熟紅細胞的缺陷的病癥、表征為失血的病癥、貧血、高歇氏病、溶血、嗜中性白血球減少癥、血小板減少癥、粒細胞減少和血友病。