[發明專利]TAT與PR domain的融合蛋白及其在制備抗腫瘤藥物中的應用

有效

• 申請號: 201410167723.0
• 申請日: 2014-04-24
• 公開（公告）號: CN103951756A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 胡國漢;丁茂華;金衛林
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/21;A61K38/16;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海卓陽知識產權代理事務所(普通合伙) 31262
• 代理人: 巫蓓麗

【技術領域】

本發明涉及分子生物學技術領域，具體地說，涉及TAT與PR?domain的融合蛋白及其在制備抗腫瘤藥物中的應用。

【背景技術】

良性腦膜瘤（WHOI級）通常有良好的預后，然而非典型和惡性腦膜瘤（WHOII級和WHOIII級）預后較良性腦膜瘤差。良性腦膜瘤的預后主要取決于手術部位，而高級別腦膜瘤（WHOII級和WHOIII級）術后復發率較高，而且目前沒有有效的化療靶標。

抑癌基因RIZ1定位于染色體1p36，在多種腫瘤中均發現低表達或表達沉默，我們前期的研究結果發現，隨著腦膜瘤級別的升高，RIZ1的表達量下降。PR-domain是RIZ1基因氨基末端的200個核苷酸序列，目前被證實是RIZ1基因發揮抑癌作用的主要功能區域。因此可以使用PR-domain的抑癌作用來治療高級別腦膜瘤。

細胞穿膜肽（Cell-Penetrating?Peptides，CPPs）能夠有效地引導蛋白質甚至納米粒子進入細胞，并可靶向細胞核，其穿膜能力不依賴經典的胞吞作用。TAT是HIV-1病毒中的反義激活多肽，全長86個氨基酸，可介導與其融合的多肽或蛋白跨越細胞膜或血腦屏障。TAT蛋白轉導系統為PR?domain蛋白應用于高級別腦膜瘤的治療提供了一個有力的途徑，有望于促進載體穿膜，發揮和加強PR-domain的抑癌作用。

目前尚未見細胞穿膜肽與PR-domain結合治療腫瘤的報道。細胞穿膜肽能否有效引導外源蛋白進入細胞核取決于細胞穿膜肽和外源蛋白融合蛋白的構象，本發明則致力于構建能高效穿膜、抑癌效果好的TAT與PR?domain的融合蛋白。

【發明內容】

本發明的目的是針對現有技術中的不足，提供一種TAT與PR?domain的融合蛋白。

本發明的再一的目的是，提供一種編碼TAT與PR?domain的融合蛋白的核苷酸序列。

本發明的另一的目的是，提供一種表達載體。

本發明的第四個目的是，提供一種宿主細胞。

本發明的第五個目的是，提供上述TAT與PR?domain的融合蛋白、編碼TAT與PR?domain的融合蛋白的核苷酸序列、表達載體、宿主細胞的用途。

本發明的第六個目的是，提供一種抗腫瘤的藥物組合物。

為實現上述第一個目的，本發明采取的技術方案是：

一種TAT與PR?domain的融合蛋白，所述TAT與PR?domain的融合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.7或SEQ?ID?NO.9所示。

為實現上述第二個目的，本發明采取的技術方案是：

一種編碼TAT與PR?domain的融合蛋白的核苷酸序列，所述的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8或SEQ?ID?NO.10所示。

為實現上述第三個目的，本發明采取的技術方案是：

一種表達載體，所述的表達載體含有如上所述的編碼TAT與PR?domain的融合蛋白的核苷酸序列。

為實現上述第四個目的，本發明采取的技術方案是：

一種宿主細胞，所述的宿主細胞含有如上所述的表達載體，或其基因組中整合有外源的如上所述的編碼TAT與PR?domain的融合蛋白的核苷酸序列。

所述的宿主細胞是細菌細胞、真菌細胞、或這些宿主細胞的后代。

為實現上述第五個目的，本發明采取的技術方案是：

如上所述TAT與PR?domain的融合蛋白、所述的核苷酸序列、所述的表達載體或所述的宿主細胞在制備抗腫瘤藥物中的應用。

所述腫瘤為腦膜瘤。

為實現上述第六個目的，本發明采取的技術方案是：

一種抗腫瘤的藥物組合物，所述的藥物組合物包含如上所述TAT與PR?domain的融合蛋白與常規藥用載體。

本發明優點在于：