[發(fā)明專利]血清淀粉樣蛋白A1的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410167087.1
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN103908679A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設計）人: 陳琪;賁晶晶;張艷;陳麗莉;朱旭冬;李飛;柏惠;李曉宇;張瀚文;楊青
• 申請（專利權）人: 南京醫(yī)科大學
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K39/395;A61P35/00
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 李紀昌;唐循文

技術領域

本發(fā)明涉及血清淀粉樣蛋白A1（serum?amyloid?A1，SAA1）在非小細胞肺癌轉移診斷領域中的應用。

背景技術

肺癌是人類最常見的惡性腫瘤之一，在全世界范圍內，肺癌的致死率高達所有罹患肺癌人群總數的28%。與此同時，全球肺癌的發(fā)病率以每年5%的速度在攀升，預計到2020年，肺癌的致死率將到達50%。目前肺癌一般都是在晚期才被發(fā)現，對于肺癌的早期檢測手段還很匱乏。當下罹患肺癌的病人能生存到5年以上的不足15%。在肺癌的晚期，腫瘤細胞會轉移到全身的淋巴結以及遠處的其他器官，包括肝臟，腎臟，腦以及骨等等，超過90%的肺癌病人最終死于晚期的肺癌轉移。因此，如何預防以及治療肺癌的轉移是臨床上防治肺癌的一項重要問題，尋找防治肺癌轉移的新靶點具有較高的臨床醫(yī)學價值。

血清淀粉樣蛋白A（serum?amyloid?A，SAA）是一種急性時相反應蛋白，屬于載脂蛋白家族中的異質類蛋白質，相對分子量約12KD。在急性時限反應中，經IL-1、IL-6和TNFα刺激，SAA在肝臟中由被激活的巨噬細胞和纖維母細胞合成，可升高到最初濃度的100-1000倍。與C反應蛋白類似，血清淀粉樣蛋白A濃度是反映感染性疾病早期炎癥的敏感指標。SAA1是SAA家族中的一員，然而關于SAA1與非小細胞肺癌轉移的相關研究尚未見文獻報道。

發(fā)明內容

解決的技術問題：本發(fā)明提供一種血清淀粉樣蛋白A1的應用，其作為肺癌轉移的靶標，通過siRNA干預細胞SAA1，有效抑制SAA1促進肺癌細胞侵襲。

技術方案：血清淀粉樣蛋白A1作為靶標在制備治療肺癌轉移試劑盒中的應用。

所述試劑盒中含有如SEQ?ID?NO:1～4所示的siRNA。

所述試劑盒中含有如SEQ?ID?NO:5所示序列的血清淀粉樣蛋白A1多克隆抗體。

治療肺癌轉移試劑盒，肺癌轉移的靶標為血清淀粉樣蛋白A1。

所述的試劑盒含有如SEQ?ID?NO:1～4所示的siRNA。

所述的試劑盒，含有如SEQ?ID?NO:5所示序列的血清淀粉樣蛋白A1多克隆抗體。

有益效果：本發(fā)明提供一種血清淀粉樣蛋白A1在制備治療肺癌轉移試劑盒中的應用，該試劑盒利用siRNA抑制巨噬細胞SAA1表達，或給予制備的SAA1多克隆抗體，干預細胞SAA1，可有效抑制SAA1促進肺癌細胞侵襲。

附圖說明

圖1.將3×10⁵個路易斯肺癌細胞(LLC)以尾靜脈注射的方式注入到野生型和SR-A基因敲除型小鼠的體內，構建小鼠肺癌轉移模型，飼養(yǎng)三周后，處死小鼠，提取兩組小鼠的肺組織大體標本圖。

圖2.收取野生型和SR-A基因敲除型兩組肺癌造模后小鼠的肺組織大體標本，統計兩組小鼠肺組織上的腫瘤轉移灶的數量示意圖。

圖3.利用野生型和SR-A基因敲除型兩組小鼠構建肺癌轉移模型后，統計兩組小鼠的生存周期示意圖。

圖4.收取野生型和SR-A基因敲除型兩組肺癌造模后小鼠的肺組織，提取肺組織的RNA，通過RT-PCR的方法檢測兩組小鼠肺組織中SAA1的表達水平示意圖。

圖5.收取野生型和SR-A基因敲除型兩組肺癌造模后小鼠的肺組織，提取肺組織的蛋白質，通過Western?Blot的方式檢測兩組小鼠肺組織中SAA1的蛋白表達水平示意圖。

圖6.收取野生型和SR-A基因敲除型兩組肺癌造模后小鼠的血清，通過ELISA試劑盒檢測兩組小鼠血清中SAA1的表達水平示意圖。

圖7.收取野生型和SR-A-/-基因敲除型兩組肺癌造模后小鼠的肺組織標本，經過石蠟包埋后制作成組織切片，通過免疫組織化學的方法檢測兩組小鼠肺組織中的SAA1的表達情況示意圖。

圖8.收取野生型和SR-A基因敲除型兩組肺癌造模后小鼠的肺組織標本，經過石蠟包埋后制作成組織切片，通過免疫熒光的方法檢測CD68和SAA1的表達情況示意圖。其中，紅色熒光標記的是CD68，反映巨噬細胞的浸潤情況，綠色熒光標記的是SAA1。

圖9.將野生型和SR-A基因敲除型兩組小鼠的巨噬細胞與LLC進行共培養(yǎng)24h后，提取兩組巨噬細胞的RNA，通過RT-PCR的方式檢測巨噬細胞中SAA1的表達水平示意圖。

圖10.將野生型和SR-A基因敲除型兩組小鼠的巨噬細胞與LLC進行共培養(yǎng)24后，收取共培養(yǎng)的細胞上清，通過ELISA試劑盒檢測上清中SAA1的表達水平示意圖。