[發明專利]一種黃獨胚性愈傷組織有機繼代保存的方法

有效

• 申請號: 201410166898.X
• 申請日: 2014-04-20
• 公開（公告）號: CN103918556A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 洪森榮;尹明華
• 申請（專利權）人: 上饒師范學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域：

本發明涉及一種植物愈傷組織保存方法，確切地說是一種黃獨胚性愈傷組織有機繼代保存的方法。

背景技術：

黃獨(Dioscorea?bulbifera?L.)為薯蕷科薯蕷屬植物，一般藥用其塊莖，主要用于治療各種甲狀腺疾病和多種癌癥。誘導黃獨胚性愈傷組織可以為黃獨變異株選擇和轉基因研究提供受體。建立遺傳性穩定、轉化效率高、易于再生的受體系統，是轉基因研究的關鍵技術之一。迄今為止，建立轉基因受體系統最為有效的方法是誘導培養胚性愈傷組織。然而，胚性愈傷組織的繼代保存存在一定的問題，如胚性愈傷組織的胚性保持時間短，由于植物激素的使用導致部分胚性愈傷組織轉為非胚性愈傷組織，長期的激素繼代保存使胚性愈傷組織再生能力喪失等，難以為轉基因研究提供足夠的受體。針對這些問題，本發明開發了一種黃獨胚性愈傷組織有機繼代長期保存的方法，可為黃獨組培苗變異株選擇和轉基因實驗長期提供受體材料。

發明內容：

本發明的目的是提供一種再生能力強胚性活躍的黃獨胚性愈傷組織有機繼代保存的方法。實現本發明目的的技術方案是，一種黃獨胚性愈傷組織有機繼代保存的方法，其特征在于有以下步驟：(1)在超凈工作臺內，將黃獨微型塊莖胚性愈傷組織先接入培養基一(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L土豆汁+1-2g/L水解酪蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-2500lx；(2)在培養基一上培養60d后，將黃獨胚性愈傷組織轉入培養基二(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L胡蘿卜汁+1-2g/L水解乳蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-2500lx；(3)在培養基二上培養60d后，將黃獨胚性愈傷組織轉入培養基三(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L西紅柿汁+1-2g/L水解酪蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-2500lx；(4)在培養基三上培養60d后，將黃獨胚性愈傷組織轉入培養基四(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L蘋果汁+1-2g/L水解乳蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-2500lx；(5)在培養基四上培養60d后，將黃獨胚性愈傷組織轉入培養基五(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L梨汁+1-2g/L水解酪蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-25001x；(6)在培養基五上培養60d后，將黃獨胚性愈傷組織轉入培養基六(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L椰子汁+1-2g/L水解乳蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-2500lx；(7)在培養基六上培養60d后，將黃獨胚性愈傷組織再依次轉入上述培養基一、培養基二、培養基三、培養基四、培養基五和培養基六中，培養時間仍各為60d，用這六種培養基依次對黃獨胚性愈傷組織進行繼代培養5年，黃獨胚性愈傷組織的再生能力不會降低，胚性不會喪失。

具體實施方式：

結合下述實施例對本發明作進一步說明：

(1)黃獨胚性愈傷組織的第一次繼代保存

在超凈工作臺內，將黃獨微型塊莖胚性愈傷組織先接入培養基一(MS+10-20g/L香蕉汁+5-10g/L土豆汁+1-2g/L水解酪蛋白+0.5-1g/L蛋白胨+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂，不調pH)，接種后將材料放入培養室培養，培養室培養條件為：溫度25±2℃，光照時間16h/d，光強1500-25001x；

(2)黃獨胚性愈傷組織的第二次繼代保存