[發明專利]米曲霉TJTSW001及其在中藥淡豆豉發酵中的應用

有效

• 申請號: 201410166284.1
• 申請日: 2014-04-22
• 公開（公告）號: CN104073444A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 陳小林;趙敏;邵麗芳;王瑞
• 申請（專利權）人: 杭州桐君堂生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A61K36/48;C12R1/69
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明涉及米曲霉，尤其是涉及一種米曲霉TJTSW001及其在中藥淡豆豉發酵中的應用。?

背景技術

淡豆豉是一味常用的傳統中藥，始載于《名醫別錄》，歷代本草都有記載，它是常用中成藥“銀翹解毒片”處方的主要藥味之一，也是歷代《中國藥典》的收錄品種。本品為豆科植物大豆的成熟種子的發酵加工品，除黑色種皮品系的大豆為主要原料外，還用桑葉、青蒿等藥材配以其中進行發酵。中醫傳統應用本品于臨床的功效主治為:解表、除煩、宣發郁熱。用于感冒、寒熱頭痛、煩躁胸悶、虛煩不眠等。?

大豆異黃酮是大豆的主要生理活性成分，現代研究表明其具有如下功用：?

(1)防癌、腫瘤及抗癌腫瘤作用。?

(2)預防骨質疏松。?

(3)降膽固醇和心臟保護作用。?

(4)神經保護及抗神經退行性疾病等等。?

大豆異黃酮在大豆中，主要有兩種存在形式，一種為游離型苷元，包括染料木素(又稱大豆苷元，金雀異黃素)和黃豆苷，另一種為結合型的糖苷。糖苷主要以丙二酰染料木素，丙二酰大豆苷，染料木苷，大豆苷的形式存在。大豆中主要以結合型的糖苷為主，游離的苷元占比相當少，約占總量的2-3％。需要指出的是，苷元的活性要遠高于糖苷。結合型的糖苷需要水解成苷元才能發揮作用。因此，如果能將糖苷水解成苷元的形式，將獲得更高的生理活性。郭文勇通過實驗發現(中藥淡豆豉的質量評價方法及其“解表除煩”作用機制研究,碩士學位論文，2004年)淡豆豉中的異黃酮與其“解表除煩“的功效存在一定聯系。因此，獲得更高活性的大豆異黃酮苷元，對提高淡豆豉的藥效有十分顯著的現實意義。?

中藥淡豆豉發酵用的微生物，絕大多數均記載為自然發酵的方式，如《中華人民共和國藥典》2010版，關于淡豆豉的記載“用煎過的桑葉、青蒿渣覆蓋，?悶使發酵至黃衣上遍時，取出，除去藥渣。洗凈，置容器內再悶15-20天，至充分發酵，香氣溢出時，取出，略蒸，干燥，即得。”此外，同樣的表述在《湖南省中藥炮制規范》1983版，《上海市中藥炮制規范》2008版中等均出現過。毋庸置疑，上述發酵的過程中存在眾多微生物的共同作用。但從長“黃衣”，以及相關研究可以明確，米曲霉在其發酵的過程中占據著十分優勢的地位。《浙江省中藥炮制規范》2005版則十分明確的表述了接種米曲霉孢子進行發酵。?

發明內容

本發明的目的就是為了解決上述問題，提供一種米曲霉TJTSW001，該米曲霉菌株可高產糖苷酶，可以高效的將結合型的大豆異黃酮水解成苷元和糖。?

本發明的另一目的是應用米曲霉菌株TJTSW001發酵生產中藥淡豆豉，獲得高含苷元的中藥淡豆豉。?

本發明提供的米曲霉菌株是(Aspergillus?oryzae)TJTSW001，該菌株已于2014年3月20日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，菌種保藏編號為CGMCC?NO.8945，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所。?

該菌株是經過60Co和紫外復合誘變獲得。該菌株具有很高的產糖苷酶活性，利用該菌株生產中藥淡豆豉可以獲得高含苷元的，大幅高于目前文獻報道淡豆豉中苷元含量。?

本發明所提供的米曲霉菌株，是通過⁶⁰Co和紫外誘變復合誘變獲得的。?

首先，將生長好的米曲霉孢子用無菌水洗下，制成孢子懸液，然后將該孢子懸液置于輻照劑量為20ky的⁶⁰Co照射下，進行誘變。誘變結束的孢子懸液，倒入平皿上，在紫外燈的照射下，進行二次誘變。誘變完成后，在黑暗的環境中靜止片刻，以防止光復活。?

然后，在篩選培養基上進行篩選培養，篩選培養基以大豆異黃酮為惟一碳源，以(NH₄)₂SO₄為氮源，以在篩選培養基上形成單個菌落為合適稀釋度。以菌落大小為挑選依據，選擇出目標菌。?

本發明所獲得的米曲霉(Aspergillus?oryzae)TJTSW001，可以在以大豆異?黃酮為惟一碳源，以(NH₄)₂SO₄為氮源的培養基上生長良好，培養三天，其菌落直徑可達3厘米。進一步利用其發酵淡豆豉，測定其糖苷酶。?

本發明具有如下有益效果：?

本發明所獲得米曲霉(Aspergillus?oryzae)TJTSW001，將其運用在中藥淡豆豉的生產上，可以獲得高含大豆苷元的淡豆豉，從而可以增加其功效性，具有廣泛的前景。?

具體實施方式