[發明專利]一種重組人角質細胞生長因子-2突變體的活性穩定劑

有效

• 申請號: 201410166013.6
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN103923208A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 陳惠華;鄒民吉;徐東剛;徐濤
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C07K14/50
• 分類號: C07K14/50;C07K1/00;A61K38/18
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 朱琨

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種重組人角質細胞生長因子-2突變體的活性穩定劑。

背景技術

角質細胞生長因子2(KGF-2)也叫成纖維細胞生長因子-10(FGF-10)，是FGFs家族中角質細胞生長因子(keratinocyte?growth?factors，KGFs)亞家族的一員。KGFs亞家族目前只有兩個成員，即KGF(FGF-7)和KGF-2，它們的蛋白序列及結構相似性高，而且都能與上皮細胞表面的受體FGFR2IIIb特異性結合，并促進上皮細胞的生長、增殖和分化。其中KGF因對放化療引起的黏膜損傷有非常好的保護作用已經在2004年被美國FDA批準上市，而KGF-2同樣也進入到臨床試驗階段。

KGF-2能夠參與血管生成、機體的損傷反應和修復、細胞的分化和遷移等眾多過程。動物實驗已表明，KGF-2在促進皮膚創口愈合，以及預防化療和放療過程引起的黏膜炎、治療潰瘍和腸炎等方面療效顯著。另外，KGF-2能降低輻射引起的局灶性肺炎和肺纖維化程度，還能夠保護毛囊干細胞，減少輻射造成的脫發。另外，KGF-2由于其受體的特異性，使它只具有黏膜損傷保護作用，卻沒有潛在的副作用。Alderson等對人的乳腺痛、卵巢癌、肺癌等30種癌細胞系進行的體內外實驗結果發現KGF-2并不促進這些腫瘤細胞生長，表明KGF-2只選擇性作用于正常上皮細胞而不促進腫瘤細胞的增殖，同時也不影響腫瘤細胞對放療的敏感性。

鑒于KGF-2在黏膜損傷防護及治療方面的獨特功效，目前已成為國內外醫藥領域的研究熱點。美國的人類基因組科學公司(Human?Genome?Sciences,Inc.)曾經開展多年的KGF-2的相關研究，除臨床前試驗外，該公司已經完成I期臨床研究，證明了其安全性，另外針對三個適應癥進行了II期臨床試驗，一是靜脈潰瘍，二是骨髓移植前高劑量放化療引起的黏膜損傷修復，三是潰瘍性大腸炎。

我們在前期的研究中，系統地研究了KGF-2的結構與功能關系，通過生物信息學和基因定點突變技術對KGF-2改構，構建并篩選獲得了高活性KGF-2突變體,已經申請國家發明專利并獲得授權(國家發明專利授權號：ZL200410034009.0)。

在此基礎上我們建立并優化了重組人KGF-2突變體(recombinant?human?keratinocyte?growth?factor2mutant，簡稱rhKGF-2M)的制備與純化工藝，實現了高效可溶性表達，初步藥效學研究表明其對放射性黏膜損傷有顯著的治療作用，因此是一個很有前景的放射防護和治療藥物。但是該突變體的穩定性較差，不易長期保存，因此需要添加活性穩定劑來保存該制品。如果沒有合適的活性穩定劑來增強其穩定性并且保持其活性，將嚴重影響將來的臨床應用。目前尚無明確的用于KGF-2突變體的活性穩定劑配方。

參考其他生長因子類藥物，目前常用的蛋白保護劑如人血白蛋白或者牛血清白蛋白因為屬于血液來源，有潛在的感染其它血源性疾病的風險，故本制品不做優先考慮；而非血液來源的甘露醇-蔗糖-檸檬酸緩沖體系則不能很好的維持本生物制品的活性，因此我們通過對緩沖體系、保護劑和其它添加劑等進行組合分析，篩選得到最佳的活性穩定劑。

發明內容

本發明的目的就是提供一種重組人角質細胞生長因子-2突變體(recombinant?human?keratinocyte?growth?factor2mutant，簡稱rhKGF-2M)的活性穩定劑，該劑型可以增強rhKGF-2M的穩定性并保持其生物學活性。

為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：

一種rhKGF-2M的活性穩定劑，由緩沖鹽溶液和保護劑組成；上述緩沖鹽溶液的pH為6.0-8.0；上述保護劑由乳糖、右旋糖酐40和甘氨酸組成；在活性穩定劑中，乳糖的濃度為1wt％-2wt％，右旋糖酐40的濃度為3wt％-4wt％，甘氨酸的濃度為20-50mM。

一種優選的rhKGF-2M的活性穩定劑，在活性穩定劑中，乳糖的濃度為1wt％，右旋糖酐40的濃度為3wt％，甘氨酸的濃度為20mM。

上述緩沖鹽溶液為檸檬酸鹽緩沖液或磷酸鹽緩沖液。

其中，磷酸鹽緩沖液的配方如下：磷酸氫二鈉：2.5-19.0mM；磷酸二氫鈉：1.0-17.5mM；EDTA：1-5mM；NaCl：10-150mM；pH6.0-8.0。

進一步優選的磷酸鹽緩沖液的配方如下：磷酸氫二鈉：15.4mM；磷酸二氫鈉：4.6mM；EDTA：2mM；NaCl：100mM；pH7.3。