[發明專利]蛇足石杉內生真菌菌株及其應用

有效

• 申請號: 201410165639.5
• 申請日: 2014-04-23
• 公開（公告）號: CN103937688A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發明（設計）人: 黎萬奎;王浙健;王莉莉;馬昭;唐承晨;夏曉蓉;胡之璧;王崢濤
• 申請（專利權）人: 上海中醫藥大學
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P21/06;A61K36/06;A61P25/28;C12R1/645
• 代理公司: 上海麥其知識產權代理事務所(普通合伙) 31257
• 代理人: 董紅曼

技術領域

本發明涉及微生物學及化學領域，具體涉及一種蛇足石杉內生真菌EurotiaceaePenicillium?sp.L10Q37菌株及其應用。

背景技術

老年癡呆癥(Alzheimer’s?disease，AD)是一種中樞神經系統退行性疾病，臨床表現為記憶功能衰退、社交識別能力出現故障。研究發現，有10％～15％的老年人患有不同程度的癡呆，其中60％～70％為老年癡呆。到目前為止，老年癡呆發病機制尚未明確。膽堿能神經損傷假說是被世界上較為認可的老年癡呆癥致病機制，基于該假說而開發的乙酰膽堿酯酶(acetylcholine，AChE)抑制劑能有效地改善老年癡呆癥，成功用于臨床的有他克林(Tacrine)、多奈哌齊(Donepezil)、利伐司替明(Rivastigmine)、加蘭他敏(Galanthamine)、和石杉堿甲(Huperzine?A)等。

人腦有數千億個神經元，它們縱橫交錯、相互交聯，乙酰膽堿是它們之間傳遞化學信息的一種重要的神經遞質。它傳導的信息與人的認知、學習、記憶功能密切相關，其代謝過程的紊亂與AD癥的發病密切相關。

乙酰膽堿存在于軸突囊泡，它由乙酰轉化酶參與合成，隨著神經沖動的傳導，乙酰膽堿被釋放到突觸間隙，再與突觸后膜上的多種受體結合，經過一系列的生化反應，引起突觸后膜電位的變化，形成電信號向下一級傳遞。研究表明，90％患有AD病的患者在神經沖動傳輸過程中缺乏乙酰膽堿，而乙酰膽堿酯酶的功能就是分解乙酰膽堿。所有抑制乙酰膽堿酯酶的作用是控制和緩解老年性癡呆癥的關鍵。

植物內生真菌是指那些在其生活史的一定階段或全部階段生活于健康植物的各種組織和器官內部的真菌，不僅包括了互惠共利的和中性的內共生真菌，也包括了那些潛伏在宿主體內的病原菌。目前，在所有研究過內生真菌的植物中都發現內生真菌，少則十幾種，多則近百種。研究發現內生真菌能產生許多活性次級代謝產物，從而能夠增強植物的抗逆性，并且這些活性次級代謝產物經常具有多種生物活性。據統計，從內生真菌中發現新活性化合物的比例為51％，遠遠超過土壤微生物的38％。研究證明藥用植物內生真菌能夠產生與宿主植物相同或相似的藥用活性成分，特別是還發現許多新的活性成分，是宿主植物所不具備的，而且，微生物還具有生長周期短、容易培養，易分離活性成分等優勢。另外，從植物內生真菌發酵產物中可以大量獲得所需藥物，能克服天然藥材不足的問題。因而，植物內生真菌作為潛在的藥物資已成為發現新天然活性物質的重要資源。

發明內容

本發明提供了一種蛇足石杉內生真菌Eurotiaceae?Penicillium?sp.L10Q37菌株，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏日期為2014年1月12日，保藏編號為CCTCC?NO.M2014021。本發明蛇足石杉內生真菌Eurotiaceae?Penicillium?sp.L10Q37菌株分離自云南產蛇足石杉根部，分離純化后保藏于武漢大學中國典型培養物保藏中心。

本發明蛇足石杉內生真菌Eurotiaceae?Penicillium?sp.L10Q37菌株具抗乙酰膽堿酯酶活性。

本申請的發明人從蛇足石杉中分離其內生真菌，將內生真菌發酵獲得發酵產物，然后對發酵產物進行抗乙酰膽堿酯酶活性測定，結果篩選到一株內生真菌L10Q37，該菌株的發酵產物提取物具有較強的抗乙酰膽堿酯酶活性，IC₅₀值為8.83ug/ml。經形態學鑒定，ITS測序和系統發育樹構建，表明L10Q37為散囊菌科青霉屬(Eurotiaceae?Penicillium)。本發明所述的Eurotuaceae?Penicillium?L10Q37已于2014年1月12日，保藏在中國典型培養物保藏中心(簡稱CCTCC)，保藏編號為CCTCC?M2014021。上述菌株的生物學形態描述為：在PDA培養基菌落呈，最初氣生菌絲淡色，漸變為青色；菌落緊密，圓形，邊緣不整齊，背面黃褐色，如圖1所示；電鏡下可見該菌株菌絲無分枝，分生孢子梗粗糙，有橫隔，有幾輪不對稱的小梗，小梗呈放射狀，頂端產生分生孢子、細小橢圓形，如圖2所示。

本發明上述蛇足石杉內生真菌Eurotiaceae?Penicillium?sp.L10Q37菌株的遺傳特性，該內生真菌5.8rDNA序列為，如SEQ?ID?NO.1所示：