[發明專利]一種呋喃半乳寡糖及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201410164094.6
• 申請日: 2014-04-22
• 公開（公告）號: CN104072543A
• 公開（公告）日: 2014-10-01
• 發明（設計）人: 陳蔭;李佩佩;王斌;牛慶鳳
• 申請（專利權）人: 浙江海洋學院
• 主分類號: C07H3/06
• 分類號: C07H3/06;C08B37/00;C12P19/04;A61K31/715;A61P37/02;C12R1/80
• 代理公司: 寧波誠源專利事務所有限公司 33102
• 代理人: 袁忠衛

1.一種呋喃半乳寡糖，其特征在于：該呋喃半乳糖的結構簡式為[→5)-β-D-Galf-(1→5)-β-D-Galf-(1→]n，由不同聚合度n為2～7的呋喃構形的半乳糖通過β-(1→5)連接方式依次連接。

2.根據權利要求1所述的呋喃半乳寡糖的制備方法，包括步驟：

a、菌種的發酵：以深海真菌灰黃青霉菌為出發菌株，采用斜面菌種進行液體搖瓶培養；

b、真菌胞外多糖的提?。喊á龠^濾、②脫色、③醇沉、④透析、⑤純化，其中：

①過濾：取步驟a的發酵液經濾紙抽濾除去菌絲體及其中的粗雜質，再萃取除去脂溶性小分子物質；

②脫色：采用活性炭脫色，在80-100℃水浴中0.5-1.5％活性炭緩慢加入到過濾后的發酵液中保溫并攪拌5-10min，待溶液冷卻至室溫后，用漏斗抽濾至干即可；

③醇沉：脫色后的溶液濃縮至原體積1/10-1/5，加入原體積1/5-1/3體積的有機溶劑，劇烈震蕩后離心，吸出上層水相后，將75％-95％的乙醇緩慢加入到濃縮液中，使乙醇終濃度達到70％-80％，把醇沉后的溶液放入冰箱中靜置過夜；

④透析：步驟③所得的沉淀部分用濾紙抽濾，并脫水脫色后于40℃-60℃烘箱烘干，取烘干粉末溶于蒸餾水后離心的上清液置于孔徑為3500Da-5000Da的透析袋在自來水中透析40h-50h，再用去離子水透析20h-30h，收集透析后的提取液，將透析液濃縮凍干即得到胞外多糖粗品；

⑤純化：將步驟④所得多糖溶液配制成水溶液，離心后進行梯度洗脫，經分析、分別收集合并各含糖組分，減壓濃縮，透析脫鹽，凍干，得到目標多糖。

c、呋喃半乳寡糖的制備：先將步驟b的多糖5.0mg-7.0mg，溶于0.01-0.05mol/L三氟乙酸溶液中，混勻后于80℃-100℃的水浴中反應1.5h-3h，中和后備用，再采用凝膠層析柱對降解寡糖樣品進行分離與在線檢測，根據檢測曲線分別按峰收集各峰對應部分，脫鹽后凍干即得呋喃半乳寡糖。

3.根據權利要求2所述的呋喃半乳寡糖的制備方法，其特征在于：所述步驟a中的斜面菌種培養，培養基組成是以g/100ml計:馬鈴薯15-25，葡萄糖1-3，瓊脂15-25，加水定容至至1L，pH值為自然，斜面菌種培養溫度25-33℃，培養150-250小時。

4.根據權利要求2所述的呋喃半乳寡糖的制備方法，其特征在于：所述步驟a中，搖瓶培養，培養基組成是以g/100ml計:麥芽糖1-10，甘露醇2-5，葡萄糖1-5，谷氨酸鈉1-3，KH₂PO₄0.05-1，MgSO40.03-2，酵母膏0.3-1和玉米漿0.1-4，加水定容至1L，pH調至5.5-6.5，25℃-28℃靜置培養7d-10d。

5.根據權利要求2所述的呋喃半乳寡糖的制備方法，其特征在于：所述步驟b中的步驟③醇沉中所述的有機溶劑為氯仿和正丁醇，其中氯仿和正丁醇的體積比為4:1。

6.根據權利要求2所述的呋喃半乳寡糖的制備方法，其特征在于：所述步驟b中的步驟③醇沉中所述的乙醇加入濃縮液中的體積比為5:1。

7.根據權利要求2所述的呋喃半乳寡糖的制備方法，其特征在于：所述步驟b中的步驟⑤采用梯度洗脫，洗脫液為以0.1-0.5mol/L的NaCl水溶液，流速為1mL/min。

8.一種權利要求1所述的呋喃半乳寡糖在制備免疫調節藥物中的應用。