[發明專利]一種乳腺癌mRNA組合的檢測試劑盒

有效

• 申請號: 201410161514.5
• 申請日: 2014-04-22
• 公開（公告）號: CN104164480B
• 公開（公告）日: 2017-03-01
• 發明（設計）人: 王義明
• 申請（專利權）人: 王義明
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種基因檢測試劑盒，尤其是一種乳腺癌mRNA組合的檢測試劑盒。

背景技術

乳腺癌歷來被認為是一種異質性疾病，無論在分子免疫表型、病理組織形態、生物學行為還是對治療的反應都存在明顯的個體差異，這種差異被認為是由于乳腺癌的分子差異(關鍵基因的異常表達)所造成的。越來越多的研究證實，乳腺癌預后與許多分子標志物密切相關，這為標志物基因分型的研究奠定了分子生物學基礎。同時，由于基因芯片及組織微陣列等高通量研究技術的出現，基因分型不僅能反映各型乳腺癌相應的臨床特點，更為乳腺癌基因分型的進一步研究提供了技術支持。

乳腺癌發生和轉移受環境和遺傳因素二者共同作用，復雜的發病機制是長期困擾醫學界的一大難題。因此，發現預測和早期診斷乳腺癌發生轉移的特異標記物是防治這類重大疾病的關鍵所在。目前，對乳腺癌的預警和早期診斷的技術主要有以下三種。1.臨床體格檢查：定期接受臨床體格檢查是早期發現乳腺癌的有效方法之一。始于1963年紐約的健康保險計劃(HIP)，歷經18年研究發現，接受定期臨床體格檢查的婦女乳腺癌死亡率比對照組低23％。我國也開展了一系列乳腺癌的預防工作，但是，由于乳腺癌普查耗資巨大，成本/效果比高，因此，我國乳腺癌早期發現主要著眼于自我檢查和提高自身保健意識，但患者偶爾觸及腫塊而就診，常常為時過晚。2.影像學診斷法：影像學檢查是以鉬靶X線攝片為主要手段，輔以超聲掃描和MRI掃描。鉬靶X線攝片最早開始于1960年，在近五十年的發展歷程中，對乳腺癌的早期診斷起到重要作用。乳腺組織本身密度小，包括腫瘤在內的很多病變表現為微小鈣化。鉬靶X線攝片方法能發現細小鈣化點，如果表現為泥沙樣鈣化或細顆粒樣鈣化，或者每1cm2內＜0.5mm的超過5枚則可提示乳腺癌。但對于不典型的病變，尤其是致密型乳腺內的病變及近胸壁的病變易漏診。2005年國際上乳腺癌診療領域的23位專家在肯定鉬靶X線攝片技術在乳腺癌早期診斷的重要地位的同時，建議結合超聲，MRI和病理檢查，進行最佳評價。雖然該方法在發達國家乳腺癌的普查和早期發現中起到很大作用，尤其是乳腺MRI技術的應用，將診斷敏感率提高至77％～100％，但是由于特殊儀器的限制，對診斷技術的高要求和昂貴的價格，使這些方法在發展中國家及地區得不到廣泛應用。3.生物靶標早期檢測：包括乳腺癌相關基因普查，例如BRCA1和BRCA2的突變分析；乳頭溢液特異物檢測及血清腫瘤標志物的測定。Her-2/neu癌基因在乳腺癌中過度表達，在血清中可以檢測到Her-2蛋白片斷。通過酶聯免疫反應測定血清Her-2水平，可以作為診斷乳腺癌的指標之一。因此，重點發展生物靶標檢測，尋找新的乳腺癌檢測靶標并發展為可供臨床檢測且簡單實用的技術對于乳腺癌患者提前預警及采取有效的治療手段意義重大。

雖然疾病組織mRNA表達譜往往與疾病發病及預后密切相關，但是檢測技術復雜、創傷大，難以真正應用于臨床診斷，且不同的mRNA對不同疾病的診斷特異性差異較大。

發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種

為解決上述技術問題，本發明所采取的技術方案是：其包括PCR反應緩沖液，靶基因COX-2、HERV-K和GAPDH標準擴增產物的梯度稀釋液；一對COX-2特異性的正、反向引物，一條COX-2特異性的探針；一對HERV-K特異性的正、反向引物，一條HERV-K特異性的探針；一對內參基因特異性的正、反向引物，一條內參基因特異性的探針。

本發明所述COX-2特異性的正向和反向引物的序列分別是5′-CCCGCAGTACAGAAAGTATC-3’和5’-CCATAGAGTGCTTCCAACTC-3’，COX-2特異性的探針序列是5'-TCAGCATAAAGCGTTTGCGGTACTCA-3’；用于HERV-K特異性的正向和反向引物的序列分別是5’-CAAATGGCGTATGTTAACTGACTT-3’和5’-GCCAATCTTTTGGGATCATG-3’，HERV-K特異性的探針序列是5’-CCGTAAACGCCGTAATTCAACCCATG-3’。

本發明所述COX-2特異性的探針和HERV-K特異性的探針的兩端均分別結合有熒光發生基團FAM和熒光淬滅基團TAMRA。

本發明所述內參基因為GAPDH。

本發明所述GAPDH的正向和反向引物的序列分別是5'-GCATCCTGGGCTACACTGAG-3’和5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3’，GAPDH特異性的探針序列是5'-TCCTCTGACTTCAACAGCGACACCC-3’。