[發明專利]一株好氧反硝化細菌菌株

有效

• 申請號: 201410160285.5
• 申請日: 2014-04-18
• 公開（公告）號: CN104004674B
• 公開（公告）日: 2017-02-01
• 發明（設計）人: 賀根和;張宇燕;梁亮亮;李一弘
• 申請（專利權）人: 井岡山大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/22
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物領域的細菌，尤其涉及一株好氧反硝化細菌菌株。?

背景技術

硝酸鹽是造成水體富營養化的主要污染物之一。硝酸鹽污染不但影響地表水，還對地下水造成污染，被硝酸鹽污染的飲用水還會直接危害人類健康。目前解決水體中氮素污染的方法有物理、化學和生物方法。隨著氮素污染的不斷加劇和人們對環境問題的日益重視，除氮技術，特別是生物脫氮技術已經成為控制水體污染的重要方向和手段。人們目前普遍認為，在生物脫氮過程中，硝酸鹽氮在缺氧條件下被反硝化細菌還原為氣態氮如N₂等從水中逸出。事實上，厭氧條件下氧氣的不足大大限制了細菌的生長與代謝，造成傳統的反硝化效率不高。同時，由于硝化作用是在好氧條件下進行的，在同一反應體系中硝化、反硝化作用嚴重不同步，影響了污水的徹底脫氮。?

好氧反硝化是指在有氧條件下進行反硝化的過程。好氧反硝化細菌的發現，突破了傳統理論的認識，為生物脫氮技術提供了一種嶄新的思路。然而，目前關于好氧反硝化菌發現的文章和專利報道不多，而且相關菌株的脫氮效果不高且應用范圍有限。?

本發明公布的好氧反硝化菌株能在好氧條件下進行反硝化作用，對模擬富營養化廢水也有較強的脫氮效果。?

發明內容

本發明要解決的技術問題是，提供一種好氧反硝化菌株。為治理污染的水體進行生物法脫氮治理提供一種良好的微生物材料。?

本發明的技術解決方案是，尋找分離出一種好氧反硝化菌株，該細菌命名為克雷伯氏菌屬細菌(Klebsiella?sp.)HLNR05，并于2013年12月9日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，保藏編號為：(GCMCC?No.8539)。?

該菌株的生物學特性為：革蘭氏染色反應呈陰性，葡萄糖發酵產酸、硝酸鹽還原、淀粉水解、產氨試驗呈陽性，甲基紅試驗(M.R.)呈陰性，石蕊牛奶試驗結果為產酸。在LB培養基上，培養5d時的菌落直徑大約為4mm，圓形，邊緣整齊；菌落呈乳白色，質地均勻，有光澤，表面濕潤光滑，凸起，正反面均勻一致。最適宜pH值為7.2，最適溫度28℃。?

本發明所涉及的好氧反硝化細菌是通過以下方法分離篩選得到：?

(1)于江西省吉水縣新源污水廠氧化溝中采集的活性污泥樣品10g，樣品采集后加入到盛有玻璃珠的100mL無菌水中，充分混勻并靜置30min后，取1mL上清液轉移至100mL含硝酸鹽的富集培養基三角瓶中，將該培養基置入28℃溫度，振動頻率為200rpm／min的振蕩培養箱中培養4d。4d后取1mL菌液于99mL滅菌的含硝酸?鹽的富集培養基中，在上述培養條件下培養4d，接著按同樣的操作重復3次，進行4個周期的富集培養。?

(2)取步驟(1)中的第4周期獲得的菌液1mL，加到硝酸鹽濃度提高50％的馴化培養基中，進行4個周期的馴化培養，接種量和培養條件同富集培養。獲得馴化培養液。?

(3)從步驟(2)中獲得的馴化培養液中取菌液5份，每份為1mL，分別進行梯度稀釋，選用梯度為10^-3、10^-4、10^-5、10^-6、10^-7；從每份中分別取0.1mL所得的稀釋菌液分別涂布于含有含硝酸鹽的固體平板培養基中，37℃培養2d。?

(4)用已滅菌的移液槍頭從步驟(3)的平板培養基上挑取較大而且獨立的菌落，采用劃線法接種于LB固體培養基上，于28℃培養。通過3次劃線獲得單菌落。單菌落在新鮮LB培養基中再進行擴大培養，擴大培養后的菌種，部分置于-80℃冰箱內保種，部分置于4℃保存備用。?

本發明一種好氧反硝化菌株的有益效果在于：菌株對廢水中硝態氮和總氮有較強的降解能力，環境適應能力較強，對模擬富營養化廢水具有強好的降氮效果。?

附圖說明

圖1為本發明一種好氧反硝化細菌菌株HLNR05的反硝化活性曲線圖；?

圖2為本發明一種好氧反硝化細菌菌株HLNR05同相近序列采用N-J法構建的系統進化樹圖；?

圖3為本發明一種好氧反硝化細菌菌株HLNR05在模擬富營養化廢水中的解氮效果圖。?

具體實施方式

實施例一?

菌株(Klebsiella?sp.)HLNR05的分離：?