[發(fā)明專利]一種提高纖維素酶和半纖維素酶酶活性的草酸青霉菌株

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410160118.0
• 申請(qǐng)日: 2014-04-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103911296A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曲音波;李忠海;姚光山;秦玉琪;李雪芝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/15
• 分類號(hào): C12N1/15;C12N15/80;C12N9/42;C12R1/80
• 代理公司: 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221
• 代理人: 李健康

1.一種提高纖維素酶和半纖維素酶酶活性的草酸青霉菌株，其特征在于：所述菌株命名為草酸青霉（Penicillium?oxalicum）RE-10，該菌株已于2014年3月17日保藏于“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”，其保藏號(hào)為CGMCC?No.8922。

2.權(quán)利要求1所述提高纖維素酶和半纖維素酶酶活性的草酸青霉菌株的構(gòu)建方法，步驟是：

（1）ClrB過(guò)表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)化：以草酸青霉CGMCC?No.5302基因組為模板，克隆clrB基因的編碼區(qū)與終止子區(qū)，然后以質(zhì)粒pAN7-1為模板，擴(kuò)增來(lái)源于構(gòu)巢曲霉(Aspergillus?nidulans)的3’-磷酸甘油醛脫氫酶編碼基因（gpdA）的啟動(dòng)子序列g(shù)pdA_(p)，將所獲得的gpdA_(p)啟動(dòng)子區(qū)與ClrB基因的編碼區(qū)和終止子區(qū)，利用Double-joint?PCR方法融合成clrB組成型過(guò)表達(dá)盒重組片段，然后將此重組片段與克隆載體pMD18-T經(jīng)T/A連接，從而獲得攜帶有ClrB過(guò)表達(dá)盒的載體pTClrB，將ClrB過(guò)表達(dá)盒的載體pTClrB轉(zhuǎn)入到草酸青霉菌株CGMCCNo.5302獲得轉(zhuǎn)化子ClrB的過(guò)表達(dá)菌株，命名為草酸青霉RE-ClrB，其基因型為gpdA(p)::clrB::ptra；

（2）CreA基因的敲除：通過(guò)同源重組雙交換的方法在獲得的草酸青霉RE-ClrB中敲除CreA基因；得到缺失creA基因的重組草酸青霉，命名為草酸青霉RE-CCreA，其基因型為ΔcreA::bar-gpdA(p)::clrB::ptra；

（3）Bgl2基因的敲除：通過(guò)同源重組雙交換的方法在獲得的草酸青霉RE-CCreA中進(jìn)一步敲除Bgl2基因，得到缺失bgl2基因的草酸青霉重組菌株即為提高纖維素酶和半纖維素酶酶活性的草酸青霉菌株，命名為草酸青霉（Penicillium?oxalicum）RE-10，其基因型為Δbgl2::hph-ΔcreA::bar-gpdA(p)::clrB::ptra。

3.權(quán)利要求1所述提高纖維素酶和半纖維素酶酶活性的草酸青霉菌株在生產(chǎn)纖維素酶和半纖維素酶中的應(yīng)用。