[發(fā)明專利]一種茄子黃萎病的接種方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410159891.5
• 申請日: 2014-04-21
• 公開（公告）號: CN103931432A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳麗艷;龔亞菊;黎志彬;鮑銳;孔令明;鐘利
• 申請（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝作物研究所
• 主分類號: A01G7/06
• 分類號: A01G7/06
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種茄子黃萎病的接種方法，屬于植物病理學(xué)研究技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

茄子黃萎病（Eggplant?Verticillium?Wilt）是由大麗輪枝菌（Verticillium?dahliae?Kleb.）和黑白輪枝菌（Verticillium?alboatrum?Reinke?et?Berth.）引起的一種植物維管束土傳病害，是威脅茄子生產(chǎn)的主要病害之一。

目前，研究人員一般通過人工接種鑒定對茄子黃萎病開展抗病性研究。已有研究主要采用實(shí)驗(yàn)室人工接種鑒定，一般需在光照培養(yǎng)箱或人工氣候箱內(nèi)進(jìn)行，該方法存在試驗(yàn)條件要求高的問題，且由于循環(huán)利用導(dǎo)致廢棄物不易收集、處理；此外，存在接種方法較單一、接種周期長，一般15～20天才能觀察到發(fā)病情況，30～60天才能調(diào)查病情指數(shù)，不能及時(shí)有效對茄子黃萎病進(jìn)行抗病性研究，難于防控黃萎病對茄子生產(chǎn)的危害。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)在對茄子黃萎病開展抗病性研究時(shí)，存在接種茄子黃萎病周期長、成本高，難于有效防控黃萎病對茄子生產(chǎn)危害等問題，本發(fā)明提供一種茄子黃萎病的接種方法。

本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種茄子黃萎病的接種方法，其特征在于經(jīng)過下列各步驟：

（1）將茄子種子置于40目的尼龍種子袋中，用質(zhì)量濃度為2%的次氯酸鈉溶液消毒10～15min，再用無菌水沖洗3次，然后在50～60℃的溫水中浸種30min，再用濃度為1000mg/L的GA₃（Gibberellin?A3，赤霉素）溶液浸種36h；

（2）將步驟（1）處理后的種子置于溫度為25～30℃、濕度為70～75%的條件下進(jìn)行培養(yǎng)催芽，每天用清水沖洗種子1～2次，待出芽后播入已滅菌的丹麥品氏泥炭土基質(zhì)中，直至長出3～4片真葉，得到幼苗；

（3）將黃萎病病菌的菌落用無菌水沖洗干凈，再經(jīng)過濾后調(diào)整為2×10^7?CFU/mL（CFU,?Colony?FormingUnits；CFU/mL指每毫升樣品中含有的細(xì)菌群落總數(shù))的孢子懸浮液；

（4）將步驟（2）的幼苗拔出，并在拔出過程中完成自然傷根，或者在拔出后進(jìn)行人工傷根，之后接種于步驟（3）所得孢子懸浮液中浸泡30min后，移栽至丹麥品氏泥炭土基質(zhì)中，并向每株幼苗施加50mL孢子懸浮液，再用雙層遮陰網(wǎng)覆蓋，接種后第1天不澆水，使幼苗根部與孢子懸浮液充分接觸，從第2天開始正常管理，7天后即可觀察到植株開始發(fā)病，以對茄子黃萎病的抗性進(jìn)行鑒定研究。

發(fā)病率計(jì)算公式為：（染病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)）×100%。

病情指數(shù)計(jì)算公式為：病情指數(shù)=[∑各級病株數(shù)/?(總株數(shù)×最高病級)]×100）。

病情分級標(biāo)準(zhǔn)為：

0級，無病癥；

1級，僅第一片真葉萎蔫或出現(xiàn)壞死；

2級，3片真葉萎蔫；

3級，僅心葉正常，老葉壞死，并有落葉；

4級，老葉全部落葉，僅剩新葉；

5級，植株死亡。

所述步驟（4）的人工傷根是：將植株主根的根尖部分切去0.5～1cm，切去3～5個(gè)側(cè)根的根尖1～2cm。

所述步驟（4）的接種是在日、夜平均氣溫分別為25℃和15℃、空氣相對濕度為50～90%時(shí)進(jìn)行。

本發(fā)明簡便、快速、安全、準(zhǔn)確，20天后即可統(tǒng)計(jì)發(fā)病率達(dá)100%，病情指數(shù)高達(dá)80以上。是茄子黃萎病較理想的接種方法，能廣泛用于植物黃萎病的抗性鑒定研究。通過本發(fā)明在黃萎病病菌生理小種以及茄子品種抗病性鑒定中的應(yīng)用，有助于篩選出抗性較好的優(yōu)良品種，解決目前生產(chǎn)上黃萎病抗性品種缺乏的問題，對茄子抗黃萎病育種研究具有重要的推動(dòng)作用。本發(fā)明操作簡便，節(jié)約成本和空間，且操作、處理過程中產(chǎn)生的廢棄物易于收集，從而避免造成污染；此外，本發(fā)明將自然傷根、人工傷根、菌液浸根和菌液灌根結(jié)合應(yīng)用，能有效縮短黃萎病的潛伏期和接種試驗(yàn)周期，且能提高發(fā)病率，最終準(zhǔn)確、快速地獲得病原菌致病性測定結(jié)果。

具體實(shí)施方式

下面通過實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。

實(shí)施例1

（1）將茄子種子置于40目15×10cm的尼龍種子袋中，用質(zhì)量濃度為2%的次氯酸鈉溶液消毒15min，再用無菌水沖洗3次，然后在55℃的溫水中浸種30min，再用濃度為1000mg/L的GA₃（Gibberellin?A3，赤霉素）溶液浸種36h；