[發明專利]一種苦瓜葉揮發性殺蟲組分的檢測方法

無效

• 申請號: 201410158780.2
• 申請日: 2014-04-18
• 公開（公告）號: CN103954702A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 陳宏;單少杰;郭紅梅;李翔;姜虹羽;雷盯函
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司 12207
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明屬于植物資源的綜合開發技術領域，涉及采用現代分析檢測儀器檢測植物、蔬菜化學成分的檢測方法，更具體的說是一種苦瓜葉揮發性殺蟲組分的檢測方法。

背景技術

苦瓜（Momordica?Charantia?L）又名錦荔枝、癩葡萄、癩瓜、涼瓜等，系葫蘆科苦瓜屬蔓性草本植物，據《滇南本草》、《本草綱目》記載，苦瓜葉片具有治胃痛、痢疾、療瘡腫毒、驅蟲等功效，通過田間調查和實驗證實苦瓜葉及其提取物還具有較強抗蟲性，K.?Prabakar等對苦瓜、蛇瓜、絲瓜、冬瓜和西瓜這五種葫蘆科植物葉片的甲醇提取物對致倦庫蚊（Celux?quinquefasciatus）幼蟲殺蟲活性進行了研究，結果表明苦瓜葉甲醇提取物對致倦庫蚊的殺蟲活性最大，其LC₅₀值為465.85ppm，低于其它四種葫蘆科植物。陳宏等采用乙醚、丙酮、乙醇、石油醚4種有機溶劑浸提和熱提苦瓜葉片，以提取液涂抹桑葉和甘藍葉分別飼喂家蠶和菜青蟲，試驗結果表明：4種有機溶劑提取液處理試蟲，其取食量降低，生長速率緩慢，存活率下降，其中以乙醚提取液的作用效果最強。除葉片浸提產物外，葉片揮發性物質對昆蟲也有一定的拒食性，但關于此方面研究至今未見相關的文獻報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種苦瓜葉揮發性殺蟲組分的檢測方法。本文通過氣相色譜-質譜-計算機聯用系統對苦瓜葉揮發組分作了一個系統的分析，試圖揭示苦瓜葉抗蟲作用的化學本質，為苦瓜葉片抗蟲作用的進一步研究提供參考，并為苦瓜葉作為一種植物資源的綜合開發提供科學依據。為實現此目的，本發明內容提供如下的技術內容：

????一種苦瓜葉揮發性殺蟲組分的檢測方法，其特征在于包括如下的步驟：

（1）苦瓜葉揮發性組分：

將新鮮苦瓜葉用去離子水沖洗干凈，置于陰涼潔凈處晾去表面水分，稱取500g搗碎，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間2?h，溜出液速度為80-100滴/min。蒸餾液用100mL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物經旋轉蒸發儀濃縮至5?mL，得到淡黃色油狀提取物，備用；

（2）采用GC-MS進行分析，氣相色譜條件：柱子初始溫度40℃保持3min，以5℃/min升至180℃保持2min，再以10℃/min升至280℃，保持2min，進樣口溫度：250℃，質譜連接線溫度：250℃，高純氦氣為載氣，流速1.0ml/min，分流比：10:1，進樣量：1.0μL；質譜條件：質譜電離方式為EI，電子轟擊源電子能量70eV，離子源溫度230℃，電子倍增器電壓1.0×10⁵，溶劑延遲時間：3min，掃描范圍m/z:35-1000aum；

（3）利用峰面積歸一化法計算各峰面積的相對含量，從苦瓜葉揮發性組分中分析鑒定出14種化合物，主要成分有16.21%?(Z)-牻牛兒醇醋酸酯，16.21%6-亞異丙基-1-甲基二環[3.1.0]己烷，0.92%N,N-二甲基-2-苯乙胺。

本發明具更加體的試驗方法如下：

???1、材料與方法

????1.1儀器和試劑

GC-MS聯用儀(Thermo，Focus?GC，DSQ?II，美國)

TR-5MS色譜柱（30m×25mm×0.25μm），NIST05標準譜圖庫

氯仿，丙酮、二氯甲烷、無水硫酸鈉和氫氧化鈉均為分析純（天津市元立化工有限公司）

苦瓜葉采自天津市郊區，經鑒定為葫蘆目葫蘆科苦瓜屬長豐三號苦瓜的葉片，用去離子水洗凈后烘干備用。

????1.2分析樣品的制備

采用同時蒸餾法。將新鮮苦瓜葉用去離子水沖洗干凈，置于陰涼潔凈處晾去表面水分，稱取500g搗碎，進行水蒸氣蒸餾，蒸餾時間2?h，溜出液速度為80-100滴/min。蒸餾液用100mL二氯甲烷萃取，每次20mL，萃取5次，粗提物經旋轉蒸發儀濃縮至5?mL，得到淡黃色油狀提取物作GC-MS分析。

????1.3GC-MS分析條件

氣相色譜條件：柱子初始溫度40℃保持3min，以5℃/min升至180℃保持2min，再以10℃/min升至280℃，保持2min，進樣口溫度：250℃，質譜連接線溫度：250℃，高純氦氣為載氣，流速1.0ml/min，分流比：10:1，進樣量：1.0μL；

質譜條件：質譜電離方式為EI，電子轟擊源電子能量70eV，離子源溫度230℃，電子倍增器電壓1.0×10⁵，溶劑延遲時間：3min，掃描范圍m/z:35-1000aum。