[發明專利]一種功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備方法及其抗炎活性應用有效

申請號：	201410156383.1	申請日：	2014-04-18
公開（公告）號：	CN103981232A	公開（公告）日：	2014-08-13
發明（設計）人：	潘道東;吳振;孫楊贏;曾小群;曹錦軒;李樺	申請（專利權）人：	寧波大學
主分類號：	C12P19/04	分類號：	C12P19/04;A61K31/715;A61P29/00;A23L1/29;C12R1/23
代理公司：	寧波奧圣專利代理事務所(普通合伙) 33226	代理人：	何仲
地址：	315211 浙***	國省代碼：	浙江;33
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種功能酸乳桿菌肽聚糖制備方法及其活性應用
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及肽聚糖的制備方法，尤其是涉及一種功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備方法及其抗炎活性應用。?

背景技術

乳酸菌作為一類重要的定植型腸道益生菌，被廣泛的應用于發酵食品加工中，尤其是酸乳，干酪，泡菜等。腸內乳酸菌與宿主健康的密切關系，越來越多的被國內外微生物學家闡述，尤其在誘導有關免疫調控因子的釋放來刺激免疫系統發揮其抗感染、抗腫瘤等生物效應方面。在乳酸菌對宿主的免疫調節活性方面，最近研究發現某些活菌和死菌間并沒有顯著差異，推測發揮其免疫調節作用的原因之一可能是其細胞壁中的肽聚糖（PGN）、磷壁酸（LTA）及表層蛋白等物質。益生菌肽聚糖，由于其在免疫調節中所發揮作用的探究相對缺乏，正潛移默化的被越來越多的研究者們所關注。?

嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus）作為一種重要的腸道益生菌，其細胞壁肽聚糖作為一種免疫增強劑，通過調節腸道免疫系統，可增強機體非特異性免疫功能，對機體健康具有重要作用。然而，嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備方法及抗炎活性研究未見相關報道，市場上也為出現以嗜酸乳桿菌肽聚糖相關的功能食品。?

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種對LPS引起的炎癥反應具有較好的抑炎調節功能的功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備方法及其抗炎活性應用。?

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案為：一種功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備方法，具體包括以下步驟：將海洋源的嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus）保藏號為CGMCC?No.8920，按體積百分比2.0-4.0%的接種量，接種在MRS培養基上，于37℃下，厭氧培養18-24h后，于4000-8000g離心15-20min，除去菌體發酵液，然后將沉淀菌體中加入質量分數為4%的SDS溶液，100℃下高溫裂解30min，除去蛋白成分；取沉淀物，在沉淀物中加入質量分數為10%的三氯乙酸溶液，除去磷壁酸；取沉淀物，將沉淀物于4℃過夜透析脫鹽后，將沉淀物于-80℃預凍6h后，迅速放入真空冷凍干燥設備中于80-120Pa干燥處理24h，得到的粉末即為嗜酸乳桿菌肽聚糖。?

所述的沉淀菌體與所述的SDS溶液的比例為1g：100ml，所述的沉淀菌體與所述的三氯乙酸溶液的比例為1g：100ml。?

上述功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖的抗炎活性應用，該功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖對大腸桿菌脂多糖（LPS）引起的炎癥反應具有較好的抑炎調節功能，即嗜酸乳桿菌肽聚糖對iNOS及COX-2蛋白表達具有抑制作用，在Raw264.7巨噬細胞模型上有效抑炎濃度為100-200μg/mL。?

該功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖經免疫切片發現，該功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖有效的降低了iNOS在小腸腸壁細胞的表達量，在小鼠模型上的有效抑炎劑量為100mg/kg/d。?

與現有技術相比，本發明的優點在于：?

本發明一種功能性嗜酸乳桿菌肽聚糖的制備方法及其抗炎活性應用，首次證明該嗜酸乳桿菌肽聚糖存在著降低大腸桿菌脂多糖引起的炎癥反應，為乳酸菌調節腸道免疫活性，調控相關免疫因子的釋放來刺激免疫系統發揮其抗感染，開發乳酸菌新型保健因子、功能性食品或藥品提供理論依據。

嗜酸乳桿菌（Lactobacillus?acidophilus），菌株為WZ-D1，保藏號為CGMCC?No.8920，于2014年03月14日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所。?

附圖說明

圖1為實施例1中嗜酸乳桿菌菌體掃描電鏡圖；?

圖2為實施例1中制備的嗜酸乳桿菌肽聚糖掃描電鏡圖；

圖3為實施例1中嗜酸乳桿菌肽聚糖的HPLC分析圖譜；?

圖4為實施例2中嗜酸乳桿菌肽聚糖紅外掃描光譜圖；

圖5為實施例3中嗜酸乳桿菌肽聚糖對LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞炎癥因子的抑制作用的試驗對比圖；