[發(fā)明專利]利用熒光內(nèi)濾效應(yīng)檢測(cè)雞蛋中的三聚氰胺

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410155872.5
• 申請(qǐng)日: 2014-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN103901008A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孫春燕;沈斐;曹先一
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吉林大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 長(zhǎng)春市四環(huán)專利事務(wù)所(普通合伙) 22103
• 代理人: 郭耀輝

技術(shù)領(lǐng)域

利用熒光內(nèi)濾效應(yīng)檢測(cè)雞蛋中的三聚氰胺，屬于分析化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

環(huán)丙氨嗪可以抑制雙翅目昆蟲幼蟲和蛹的生長(zhǎng)，因而常被用于農(nóng)藥、獸藥和飼料添加劑。三聚氰胺是生產(chǎn)環(huán)丙氨嗪的副產(chǎn)物，也是其代謝產(chǎn)物之一。噴灑過(guò)環(huán)丙氨嗪的水果和蔬菜，以及攝入含環(huán)丙氨嗪飼料的牲畜尿液中，經(jīng)常能檢測(cè)到三聚氰胺殘留。

為了減少雞糞便招致的蒼蠅，經(jīng)常會(huì)在母雞的飼料中添加環(huán)丙氨嗪。環(huán)丙氨嗪在母雞體內(nèi)會(huì)代謝三聚氰胺，并且雞蛋中也會(huì)有三聚氰胺的存在。

三聚氰胺C₃H₆N₆，分子結(jié)構(gòu)下所示：

三聚氰胺是氨基腈的三聚體，其分子中含有1個(gè)1,3,5-三氮雜苯環(huán)和3個(gè)氨基，含氮量高達(dá)66%。三聚氰胺可由尿素、雙氰胺或氰化氫等不同的原料制取。工業(yè)上，高純?nèi)矍璋罚?9%）通常由尿素通過(guò)氣相催化法或高壓液相催化法生產(chǎn)，低純?nèi)矍璋房蓮慕Y(jié)晶母液或煤中回收。

三聚氰胺的急性口服毒性較低，然而，長(zhǎng)期或反復(fù)地大量攝入三聚氰胺，患腎結(jié)石甚至急性腎衰竭和膀胱癌的幾率會(huì)大大增加。這是因?yàn)槿矍璋吩隗w內(nèi)會(huì)部分轉(zhuǎn)化為三聚氰酸，而三聚氰胺與三聚氰酸會(huì)結(jié)合形成無(wú)法溶解的氰尿酸三聚氰胺，進(jìn)而引起一系列生殖和泌尿系統(tǒng)疾病。

目前，三聚氰胺的檢測(cè)手段主要包括液相色譜法（HPLC）、氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）、液相色譜-質(zhì)譜法（LC-MS）等。盡管這些方法靈敏度高，這些方法需要昂貴的設(shè)備，測(cè)定時(shí)間較長(zhǎng)，成本高，需要專業(yè)技術(shù)人員操作，不適合現(xiàn)場(chǎng)快速檢測(cè)。因此需要建立一種快速、簡(jiǎn)單、靈敏的方法檢測(cè)牛奶及乳制品中三聚氰胺的含量。

國(guó)標(biāo)中采用高效液相色譜法檢測(cè)原料乳、乳制品以及含乳制品中三聚氰胺的的定量限為2mg/kg。還沒(méi)有國(guó)標(biāo)方法檢測(cè)雞蛋中的三聚氰胺。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種利用量子點(diǎn)（ZnSe?QDs）與銀納米粒子（AgNPs）之間的熒光內(nèi)濾效應(yīng)快速檢測(cè)三聚氰胺的方法，以快速、簡(jiǎn)單、靈敏的檢測(cè)雞蛋中三聚氰胺。

技術(shù)問(wèn)題：利用量子點(diǎn)與銀納米粒子之間的熒光內(nèi)濾效應(yīng)快速檢測(cè)三聚氰胺的方法基于以下原理：

在量子點(diǎn)中加入銀納米粒子后，由于熒光內(nèi)濾效應(yīng)作用，量子點(diǎn)的熒光強(qiáng)度會(huì)降低。

加入三聚氰胺(Melamine)后，三聚氰胺會(huì)強(qiáng)烈的結(jié)合到AgNPs表面，迅速地引起AgNPs的團(tuán)聚，從而減少了量子點(diǎn)發(fā)射光譜與AgNPs吸收光譜的光譜重疊。因此，熒光內(nèi)濾效應(yīng)減少的量子點(diǎn)的熒光發(fā)射會(huì)顯著恢復(fù)。

本發(fā)明的技術(shù)方案：

包括以下步驟：檸檬酸鹽穩(wěn)定的AgNPs的合成；谷胱甘肽修飾的ZnSe?QDs的合成與純化；利用熒光法觀察含有不同濃度三聚氰胺的量子點(diǎn)-膠體銀體系，運(yùn)用量子點(diǎn)的熒光恢復(fù)檢測(cè)三聚氰胺。

（1）檸檬酸鹽穩(wěn)定的AgNPs的合成：

所有的玻璃器皿都用新制備的王水浸泡24小時(shí)，再用蒸餾水漂洗干凈，80℃烘干備用。在0.25mM硝酸銀和0.25mM的檸檬酸鈉的20ml的混合溶液中加入600uL的10mM?NaBH₄溶液，同時(shí)大力攪拌。溶液逐漸從無(wú)色變?yōu)樯罨疑磻?yīng)完全后得到亮黃色溶液（大約20分鐘）。將溶液靜止放置八小時(shí)，并用0.4μm微孔膜過(guò)濾，4℃冷藏備用。

（2）谷胱甘肽修飾的ZnSe?QDs的合成與純化：0.014g硼氫化鈉與0.0078g?Se粉溶于300μL水，冰浴40min，得到NaHSe溶液。0.088g乙酸鋅與0.12g谷胱甘肽溶于100mL水中，用NaOH調(diào)節(jié)pH至11，然后加入之前制備的300μL?NaHSe溶液，同時(shí)攪拌。混合溶液在95℃加熱90min，自然冷卻至室溫。ZnSe?QDs溶液加入同體積的異丙醇，離心純化，真空干燥后復(fù)溶于水。

（3）利用熒光法觀察含有不同濃度三聚氰胺的量子點(diǎn)-膠體銀體系，運(yùn)用量子點(diǎn)的熒光恢復(fù)檢測(cè)三聚氰胺。分析步驟如下：

1mL3.9nM?AgNPs與0.3mL2mM硼酸鹽緩沖液(pH=8)混合，然后加入1.2mL不同濃度的三聚氰胺，反應(yīng)16min。然后向上述溶液中分別加入0.5mL1mM?ZnSe?QDs。以300nm激發(fā)，記錄混合液在370nm處的熒光強(qiáng)度，存在三聚氰胺時(shí)F，不存在三聚氰胺時(shí)F₀，以(F-F₀)/F₀比三聚氰胺濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。