[發明專利]一種鐵皮石斛快速繁殖方法

無效

• 申請號: 201410153939.1
• 申請日: 2014-04-17
• 公開（公告）號: CN103947549A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 李璐;林江波;陳德宗;潘菲
• 申請（專利權）人: 廈門涌泉科技有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司 35203
• 代理人: 廖吉保;唐紹烈

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其是指一種鐵皮石斛快速繁殖方法。

背景技術

鐵皮石斛為蘭科多年附生草本植物，生長于海拔達1600米的山地半陰濕的巖石上。鐵皮石斛的藥效成分主要是石斛多糖、石斛堿和總氨基酸等，且含有鈣、鐵、鋅、硒、鈉等多種微量元素，具有獨特的藥用價值。中醫以其莖入藥，名為“石斛”，屬補益藥中的補陰藥，《神農本草》列鐵皮石斛為上品，載有“主傷中、除痹、下氣、補五臟虛勞、贏瘦、強陰、久服厚腸胃”。《本草綱目》中評價鐵皮石斛“強陰益精。厚腸胃，補內絕不足，平胃氣，長肌肉，益智除驚，輕身延年”。《道藏》記載，具有滋陰補虛，生津潤肺等功效。

植物組織培養(Tissue?culture)是指利用植物細胞的全能性，從植物體內取出部分器官、組織或細胞，模擬植物體內的生理環境，在無菌、適當溫度和一定培養條件下，使之生存、生長，維持其正常結構和功能的方法。

然而，現有技術中，多數鐵皮石斛組培苗莖桿偏細，甚至多為“牙簽苗”，根系不夠發達，葉片未展開，導致后期馴化苗成活率偏低，育苗時間偏長，鮮條產量較低，生產成本較高。

發明內容

本發明的目的在于提供一種鐵皮石斛快速繁殖方法，以提高鐵皮石斛組培苗成活率，且植株健壯。

為達成上述目的，本發明的解決方案為：

一種鐵皮石斛快速繁殖方法，包括以下步驟：

一，選取外植體，對外植體進行清洗、消毒；

二，將外植體接種于不定芽誘導培養基進行誘導不定芽培養，誘導培養基配比為：MS基本培養基、6-BA(6－芐基嘌呤)2.0mg/L-3.0mg/L、NAA（萘乙酸）0.2mg/L，pH值5.4；

三，將步驟二中所得不定芽莖段接種于原球莖誘導培養基中，該培養基配比為：B5基本培養基、NAA2.0mg/L、6-BA0.2mg/L、KT（激動素）0.5mg/L-2.0mg/L，pH值5.4；

四，將步驟三中所得原球莖轉接于原球莖增殖培養基中，該培養基配比為：1/2MS基本培養基、椰汁50g/L，pH值5.4；培養條件為：光強2000lx、光照時間12h/d，搖床轉速為120r/min，每21天轉接一次；

五，將步驟四中所得原球莖轉接入分化培養基中，該培養基配比為：1/2MS基本培養基、NAA0.2mg/L、馬鈴薯浸提物80-100g/L，pH值5.4；

六，將步驟五中所得分化苗接種于壯苗生根培養基中，該培養基配比為：1/2MS基本培養基、香蕉浸提物100-150g/L，pH值5.4；置于日光燈下培養30天后，置于培養架頂層，光照強度8000Lux-10000Lux，光照時間為12h/d，光源為日光，溫度為26±2℃，培養60天后出苗；

步驟二、三及五的培養條件為：光照強度2000-3000Lux，光照時間12h/d（小時/天），光源為日光燈，溫度為26±2℃。

所述步驟一中，清洗、消毒步驟為：先用無磷洗衣粉水溶液浸泡15分鐘，然后用自來水沖洗30分鐘；用75％的酒精浸泡15秒，無菌水沖洗1次，再用0.1％HgCl₂溶液消毒8分鐘,無菌水沖洗5次。

所述步驟一中，選取表皮鐵銹色、莖節明顯、通體透明、纖維少的個體作為外植體。

所述步驟一中，外植體清洗、消毒后，吸干水分切為1.0-1.5cm的莖段，接入誘導培養基進行誘導培養。

采用上述方案后，本發明解決了鐵皮石斛組培苗莖桿偏細，根系不夠發達，葉片未展開，成活率偏低等技術問題，實現鐵皮石斛瓶苗葉片變厚，充分展開，葉色濃綠，莖桿粗壯，根系發達，成活率達98%以上，在整個繁殖流程中不添加激素，極大限度上減少了激素的使用，進一步保障了作為藥用植物的鐵皮石斛的安全性。

具體實施方式

實施例

本發明揭示一種鐵皮石斛快速繁殖方法，包括以下步驟：

一，外植體材料的選取及無菌材料的獲得

選取表皮鐵銹色、莖節明顯、通體較為透明、纖維較少的個體作為外植體。先對外植體進行清洗、消毒，具體步驟如下：先用無磷洗衣粉水溶液浸泡15分鐘，然后用自來水流水沖洗30分鐘；用75％的酒精浸泡15秒，無菌水沖洗1次，再用0.1％HgCl₂溶液消毒8分鐘,無菌水沖洗5次。

上述外植體進行清洗、消毒后，吸干水分切為1.0～1.5cm的莖段，然后接入誘導培養基進行誘導培養。

二，不定芽的誘導