[發明專利]一種從肝素制品中提取基因組DNA的方法

無效

• 申請號: 201410151885.5
• 申請日: 2014-04-16
• 公開（公告）號: CN103952398A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 呂書鋒;俞萍;李曉晨;孫克非
• 申請（專利權）人: 天根生化科技（北京）有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 羅文群

1.一種從肝素制品中提取基因組DNA的方法，其特征在于該方法包括以下各步驟：

（1）稱取20毫克肝素鈉樣品置于1.5毫升離心管中，加入400微升裂解液，振蕩混勻后放入65℃水浴鍋中保持20分鐘，每隔5分鐘振蕩一次，以使樣品充分溶解，溶解后得到的混合液呈透明狀；注意裂解液中含有不溶性樹脂，使用前應充分振蕩混懸。

（2）將上述混合液置于離心機中進行離心分離，離心分離的轉速為12000轉/分鐘，離心分離時間為5分鐘；

（3）取出步驟（2）中離心分離得到的上清液轉入硅膜吸附柱中，將硅膜吸附柱放入1.5毫升離心管中，將離心管置于離心機中，在12000轉/分鐘的轉速下離心分離30秒，棄去離心分離的廢液；

（4）向步驟（3）的硅膜吸附柱中加入400微升第一漂洗液，放入80℃水浴中，保持10分鐘，然后在12000轉/分鐘的轉速下離心分離30秒，棄去離心分離的廢液；

（5）向步驟（4）的硅膜吸附柱中加入400微升第二漂洗液，在12000轉/分鐘的轉速下離心分離30秒，棄去離心分離廢液；

（6）向步驟（5）的硅膜吸附柱中加入500微升第三漂洗液，在12000轉/分鐘的轉速下離心分離30秒，棄去離心分離廢液；

（7）重復步驟（6）2～4次；

（8）將步驟（7）的硅膜吸附柱放入1.5毫升離心管中，開蓋離心分離2分鐘；

（9）將步驟（8）的硅膜吸附柱放入一個新的1.5毫升離心管中，向吸附柱中間懸空加入50微升去離子水，靜置2分鐘；

（10）將步驟（9）中裝有硅膜吸附柱的離心管在12000轉/分鐘的轉速下離心分離1分鐘，收集洗脫液，洗脫液為基因組DNA溶液。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的裂解液的配方為：

將上述各組分分別量取后混合，加去離子水，得到混合液，用鹽酸將混合液pH值調整為8.3～8.5，定容混合液體積為1000毫升。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的第一漂洗液的配方為：

異丙醇??450～700毫升

氯化鈉??80～160克

將上述各組分分別量取后混合，加去離子水，定容混合液體積為1000毫升。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的第二漂洗液的配方為：

異丙醇??500～800毫升

聚乙二醇6000??70～120克

將上述各組分分別量取后混合，加去離子水，得到混合液，定容混合液體積為1000毫升。

5.如權利要求1所述的方法，其特征在于其中所述的第三漂洗液的配方為：

三羥甲基氨基甲烷?????0.7～1.8克

無水乙醇?????800毫升

將上述各組分分別量取后混合，加去離子水，得到混合液，定容混合液體積為1000毫升。