[發(fā)明專利]普通小麥麥谷蛋白亞基Dx2．2基因的分子鑒定方法及專用引物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410149119.5
• 申請(qǐng)日: 2014-04-14
• 公開（公告）號(hào): CN103911453A
• 公開（公告）日: 2014-07-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 司紅起;劉莉;馬傳喜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 關(guān)暢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及普通小麥麥谷蛋白亞基Dx2.2基因的分子鑒定方法及專用引物。?

背景技術(shù)

小麥麥谷蛋白的含量決定了小麥的面團(tuán)強(qiáng)度和面筋彈性，影響著小麥的加工品質(zhì)(Figueroa?et?al.2009)。研究表明，高分子量麥谷蛋白的含量在面包流變學(xué)特性方面的影響比醇溶蛋白和低分子量麥谷蛋白更為明顯。小麥高低分子量麥谷蛋白亞基通過雙硫鍵形成麥谷蛋白，其含量與小麥品質(zhì)密切相關(guān)，高分子量麥谷蛋白亞基占小麥胚乳蛋白含量的12%，含有豐富的谷氨酰胺重復(fù)序列，大量的氫鍵對(duì)小麥良好的烘焙品質(zhì)有著決定性影響(Shewry?et?al.1989)，直接決定面包綜合品質(zhì)，其等位變異可以解釋歐洲小麥品種在面包烘焙品質(zhì)方面變化的45%-70%(Branlard?and?Dardevet1985;Payne?et?al.1988)。?

由于高分子量麥谷蛋白在小麥加工品質(zhì)方面的卓越貢獻(xiàn)，其優(yōu)質(zhì)的亞基被廣泛研究應(yīng)用(Forde?et?al.1985;Sugiyama?et?al.1985;Thompson?et?al.1985;Halford?et?al.1987;Anderson?and?Greene1989;Reddy?and?Appels1993;De?Bustos?et?al.2001)。研究表明，高分子量麥谷蛋白亞基與小麥烘焙品質(zhì)關(guān)系密切(Payne?et?al.1979,Mengand?Cai2008;Pang?et?al.2009)。在Glu-1位點(diǎn)上，亞基對(duì)小麥加工品質(zhì)具有上位效應(yīng)(Rousset?et?al.1992;Luo?et?al.2001;Zhang?et?al.2009)。?

在位點(diǎn)內(nèi)部，學(xué)者對(duì)Dx2.2亞基研究較少，其表現(xiàn)與小麥品質(zhì)方面的研究較少，所以研究普通小麥高分子量麥谷蛋白亞基的組成和分布，特別是Glu-D1位點(diǎn)上Dx2.2亞基，對(duì)小麥品質(zhì)育種有重要意義。在亞基鑒定檢測(cè)方面，SDS-PAGE鑒定法局限性大，如亞基遷移率不規(guī)則，產(chǎn)品多樣性差等，因此PCR技術(shù)被廣泛應(yīng)用到生命科學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。專用引物的設(shè)計(jì)是PCR技術(shù)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，但是到目前為止，可用于檢測(cè)HMW-GS的專用引物有N、Bx17+By18、Bx14+By15等，有些麥谷蛋白的專用引物由于特異性弱、靈敏性低、重復(fù)性差、缺乏可靠的核苷酸序列等原因，尚不具備或仍需改善。進(jìn)一步發(fā)掘并驗(yàn)證其他專用引物，尤其是更方便、靈敏、準(zhǔn)確的Dx2.2亞基專用引物將促進(jìn)品質(zhì)改良進(jìn)程。通過分析研究小麥優(yōu)質(zhì)亞基的變異和亞基分布情況，有利于了解普通小麥種質(zhì)資源的性狀，為小麥品質(zhì)育種的親本選擇和有利基因的發(fā)掘和利用提供相關(guān)信息。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種鑒定或輔助鑒定麥谷蛋白亞基Dx2.2基因的引物。?

本發(fā)明提供的引物，由序列表序列1所示的單鏈DNA和序列表序列2所示的單鏈DNA組成。?

上述引物中，所述麥谷蛋白亞基Dx2.2基因來源于普通小麥Triticum?aestivum?L.。?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供鑒定或輔助鑒定麥谷蛋白亞基Dx2.2基因的PCR試劑。?

本發(fā)明提供的PCR試劑，包括上述的引物。?

上述PCR試劑由PCR擴(kuò)增緩沖液、權(quán)利要求1或2所述的引物、MgCl2、dNTP、DNA聚合酶和水組成；?

所述引物中的各條引物在所述PCR試劑中的濃度為0.2uM。?

上述PCR試劑中，所述麥谷蛋白亞基Dx2.2基因來源于普通小麥Triticum?aestivum?L.。?

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供鑒定或輔助鑒定麥谷蛋白亞基Dx2.2基因的試劑盒。?

本發(fā)明提供的試劑盒，包括上述的引物或上述的PCR試劑。?

上述試劑盒中，所述麥谷蛋白亞基Dx2.2基因來源于普通小麥Triticum?aestivumL.。?

上述的引物或上述的PCR試劑或上述的試劑盒在測(cè)鑒定或輔助鑒定麥谷蛋白亞基Dx2.2基因中的應(yīng)用也是本發(fā)明保護(hù)的范圍。?

上述應(yīng)用中，所述麥谷蛋白亞基Dx2.2基因來源于普通小麥Triticum?aestivumL.。?