[發明專利]基于硫酸苯酚快速高通量測定多糖含量的方法

在審

• 申請號: 201410149074.1
• 申請日: 2014-04-14
• 公開（公告）號: CN103901031A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發明（設計）人: 王曉力;王永剛;曾玉峰;朱新強;王春梅;張茜;路遠;王慧;汪曉斌;楊曉
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州畜牧與獸藥研究所
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 北京世譽鑫誠專利代理事務所(普通合伙) 11368
• 代理人: 郭官厚

技術領域

本發明涉及一種多糖含量的測定方法，具體涉及一種基于硫酸苯酚快速高通量測定多糖含量的方法，屬于分析化學技術領域。?

背景技術

糖是構成生物體細胞組織的重要成分，是生命的物質基礎之一。糖與營養代謝、細胞結構、抗病毒、增強免疫、物質運轉等密切相關，人體必須從食物中攝取足夠的糖以維持各項生理功能的正常運行。因此，糖含量是諸多食品的最重要營養指標之一。?

多糖含量測定的方法有很多：?

一類是利用多糖的還原性，測定還原性多糖，方法有：3,5-二硝基水楊酸鹽(DNS)比色法和Somogyi-Nelson法。?

另一類測定方法，也是目前應用最普遍的方法，糠醛縮合顯色法，其主要利用多糖在強酸性條件下脫水生成糠醛或其衍生物，然后與酚類(或胺類)化合物縮合，生成有特定吸收波長的有色物質這一性質進行測定。這類方法有地衣酚-硫酸(鹽酸)法、苯酚-硫酸法和蒽酮-硫酸法。?

由此可見，傳統測多糖方法在比色管中進行，需要加入大量的葡萄糖標準溶液和苯酚試劑，不僅檢測效率低、試劑損耗多、誤差大，而且對環境污染也較大。?

發明內容

為解決現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種基于硫酸苯?酚的、能夠實現快速、高通量測定多糖含量的方法。?

為了實現上述目標，本發明采用如下的技術方案：?

一種基于硫酸苯酚快速高通量測定多糖含量的方法，其特征在于，包括以下步驟：?

（1）將多糖測定液和濃硫酸同時添加到微孔板中，在濃硫酸的作用下多糖水解成單糖并迅速脫水形成糠醛衍生物；?

（2）向微孔板中繼續添加苯酚，苯酚與糠醛衍生物反應生成橙黃色液體；?

（3）在酶標儀中于490nm下測定多糖的光吸收值；?

（4）以葡萄糖溶液為標準液，繪制標準曲線；?

（5）將多糖的光吸收值帶入標準曲線中計算多糖含量。?

前述的基于硫酸苯酚快速高通量測定多糖含量的方法，其特征在于，前述濃硫酸的濃度為98%，前述苯酚的濃度為4.5%。?

前述的基于硫酸苯酚快速高通量測定多糖含量的方法，其特征在于，前述多糖測定液、濃硫酸、苯酚的體積比為5：15:3。?

前述的基于硫酸苯酚快速高通量測定多糖含量的方法，其特征在于，在步驟（2）中，苯酚與糠醛衍生物反應的溫度為90℃、反應時間為23min，反應完成后再進行5min冷卻處理。?

本發明的有益之處在于：本發明基于硫酸苯酚定量碳水化合物的原理，多糖在濃硫酸的作用下，先水解成單糖并迅速脫水形成糠醛衍生物，然后苯酚再與糠醛衍生物生成橙黃色化學物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，可以用于甲基化的糖、戊糖以及寡糖?類和多聚糖的測定，并且方法簡單、快速、靈敏、重復性好，顏色持久，對每種糖僅制作一條標準曲線；對于雜多糖，分析結果可根據各單糖的組成比及主要組分單糖的標準曲線的校正系數加以校正計算，在沒有必要細致劃分各種單糖的情況下，采用本發明的檢測方法可以一次測出總量，省去許多麻煩，具有特殊的應用價值；具有快速、高通量的特性，在微孔板中進行，由于微孔板孔多且需要的加入量小，所以可以同時測定多個樣品的多糖含量。?

附圖說明

圖1是苯酚濃度對測定準確度的影響圖；?

圖2是反應時間對測定準確度的影響圖；?

圖3是反應溫度對測定準確度的影響圖；?

圖4是苯酚濃度和反應時間交互作用對準確度的影響圖；?

圖5是苯酚濃度和反應溫度交互作用對準確度的影響圖；?

圖6是基于微孔板法下的葡萄糖標準曲線圖；?

圖7是基于試管比色法下的葡萄糖標準曲線圖。?

具體實施方式

以下結合附圖和具體實施例對本發明作具體的介紹。?

400μg/mL葡萄糖溶液：準確稱取0.0400g無水葡萄糖溶于蒸餾水，定容至100mL。?

濃硫酸：濃度為98%。?

4.5%苯酚：準確稱取0.4500g苯酚溶于蒸餾水，定容至10mL。?

繪制標準曲線?

以400μg/mL葡萄糖溶液作為標準溶液。?

詳細的操作過程為：?