[發(fā)明專利]一種產(chǎn)連翹脂苷A、B和連翹苷的連翹內(nèi)生真菌及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410149031.3
• 申請日: 2014-04-14
• 公開（公告）號: CN104293678B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 牛明福;萬鵬;張婷婷;李鑫玲;秦翠麗;宮強(qiáng);張敏;孫軍杰;李翔
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12P19/44;C12R1/645
• 代理公司: 鄭州睿信知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司41119
• 代理人: 牛愛周

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種產(chǎn)連翹脂苷A、B和連翹苷的連翹內(nèi)生真菌及其應(yīng)用，屬于生物技術(shù)領(lǐng)域。?

背景技術(shù)

從微生物中尋找能應(yīng)用于農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥的天然產(chǎn)物是一個不斷變化發(fā)展的過程。這些潛在的菌種資源對研究生物多樣性、發(fā)現(xiàn)新化合物和開發(fā)新藥都具有重要的意義。內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物的化學(xué)結(jié)構(gòu)多樣性也蘊(yùn)藏著其生物活性的多樣性，在農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥業(yè)中具有重要的應(yīng)用潛力。在過去70多年中，已從微生物中發(fā)現(xiàn)了3萬～5萬種天然產(chǎn)物，其中1萬多種有生物活性，8千多種具有抗菌或抗腫瘤活性。從微生物中獲得的抗生素、抗腫瘤劑、殺蟲劑、以及微生物產(chǎn)生的酶、維生素和氨基酸等都有廣泛應(yīng)用。?

植物內(nèi)生真菌是個巨大的微生物新資源，具有重要的農(nóng)藥和醫(yī)藥應(yīng)用潛力。從特殊生境植物和傳統(tǒng)的藥用植物內(nèi)生真菌次生代謝產(chǎn)物中篩選具有藥用價值的活性物質(zhì)或新型化合物以創(chuàng)制新藥，解決自然資源不足，開發(fā)緊缺及新型藥物，將在很大程度上豐富人類的藥物寶庫。?

連翹出自《神農(nóng)本草經(jīng)》，其別名又有旱連子、空翹、落翹、黃奇丹，為植物連翹的干燥果實(shí)。其對金黃色葡萄球菌、痢疾桿菌、肺炎雙球菌、人型結(jié)核桿菌、百日咳桿菌，以及流感病毒、真菌、鼻病毒等均有抑制作用。能明顯抑制炎性滲出和增強(qiáng)小鼠吞噬炎癥細(xì)胞能力。水溶液能降壓，所含蘆丁能增強(qiáng)毛細(xì)血管致密度。此外，還有解熱、利尿、鎮(zhèn)吐、抗肝損傷等作用。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種產(chǎn)連翹脂苷A、B和連翹苷的連翹內(nèi)生真菌。?

同時，本發(fā)明還提供一種產(chǎn)連翹脂苷A、B和連翹苷的連翹內(nèi)生真菌的應(yīng)用。?

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：?

一種產(chǎn)連翹脂苷A、B和連翹苷的連翹內(nèi)生真菌，所述的連翹內(nèi)生真菌為枝狀枝孢(Cladosporium?cladosporioides)，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，保藏日期：2014年1月15日，保藏編號：CGMCC?No.8728。?

一種產(chǎn)連翹脂苷A、B和連翹苷的連翹內(nèi)生真菌的應(yīng)用，具體的，連翹內(nèi)生真菌在生?產(chǎn)藥物活性成分（連翹脂苷A、B和連翹苷）中的應(yīng)用，包括以下步驟：取連翹內(nèi)生真菌（CGMCC?No.8728）發(fā)酵培養(yǎng)液，分離藥物活性成分即可。更具體的，連翹內(nèi)生真菌在制備藥物中的應(yīng)用，包括以下步驟：取連翹內(nèi)生真菌（CGMCC?No.8728）發(fā)酵培養(yǎng)液，分離藥物活性成分，與輔料混合即可。?

所述的藥物活性成分為連翹脂苷A、連翹脂苷B和連翹苷，經(jīng)分離、純化后，可以按照常規(guī)方法制備成片劑、顆粒劑、粉劑、注射液、口服液、脂質(zhì)體等劑型。所述的輔料為醫(yī)藥、農(nóng)藥領(lǐng)域常規(guī)輔料。當(dāng)制備成注射液時，輔料可采用甘露醇、葡萄糖、山梨醇等，片劑時采用淀粉、羧甲基淀粉鈉、微晶纖維素等；口服液時采用油性基質(zhì)如脂肪酸、脂肪酸甘油酯等。?

所述發(fā)酵培養(yǎng)液的制備方法為：取經(jīng)活化的連翹內(nèi)生真菌置于PDB培養(yǎng)基中，在27～29℃下震蕩培養(yǎng)4～7天即可。?

本發(fā)明的有益效果：?

本發(fā)明中連翹內(nèi)生真菌為枝胞菌黑霉菌（Cladosporium?cladosporioides），從河南省洛陽市周山風(fēng)景區(qū)的連翹活體中分離得到，屬于一種共生微生物，可以代謝產(chǎn)生與連翹成分相同的成分，具有很強(qiáng)的殺滅和抑制細(xì)菌的作用，發(fā)酵培養(yǎng)后能夠產(chǎn)生對致病性大腸桿菌（E.coli?K99，ATCC?hb-8178)）、沙門氏菌（Salmonella.Typhimurium，ATCC14028）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcus.aureus，ATCC29213）等有抑制作用的活性代謝產(chǎn)物，包括連翹脂苷A、B和連翹苷等，是醫(yī)藥行業(yè)重要的微生物資源。?

附圖說明

圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中連翹內(nèi)生真菌在100×油鏡下的菌株形態(tài)圖；?

圖2為實(shí)施例1中連翹內(nèi)生真菌18s?rDNA?PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的電泳圖；?

圖3為實(shí)施例1中連翹內(nèi)生真菌的系統(tǒng)發(fā)育樹圖；?

圖4中實(shí)施例2中連翹內(nèi)生真菌的抑菌效果圖；?

圖5為實(shí)施例2中連翹內(nèi)生真菌發(fā)酵上清液的液相色譜圖。?

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例僅對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。?

實(shí)施例1?