[發明專利]泡盛曲霉及其微生物菌劑和應用

有效

• 申請號: 201410147310.6
• 申請日: 2014-04-14
• 公開（公告）號: CN104017733A
• 公開（公告）日: 2014-09-03
• 發明（設計）人: 姚燕來;朱鳳香;薛智勇;陳曉旸;洪春來;王衛平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;A01N63/04;A01P3/00;C12R1/665
• 代理公司: 杭州賽科專利代理事務所 33230
• 代理人: 曹紹文

技術領域

本發明具體涉及一種用于防治黃瓜枯萎病的泡盛曲霉和含有該泡盛曲霉的微生物菌劑，及其在防治黃瓜枯萎病上的應用，屬于農業微生物技術領域。?

背景技術

黃瓜枯萎病是一種世界性的土傳真菌病害，由半知菌亞門鐮孢屬尖孢鐮刀菌黃瓜專化型（Fusarium?oxy?sporum?f.sp.Cucumerinum?Owen）侵染引起，可導致維管束和導管受損，最終造成黃瓜枯萎、萎蔫直至甚至死亡。在許多蔬菜基地，黃瓜枯萎病常年發病率10%-30%，重病年份可達80%-90%，一般減產30%-50%，重者絕收，嚴重影響了黃瓜的產量和品質。?

目前世界各國對黃瓜枯萎病的防治主要還是采用化學方法，雖然化學方法在一定程度上抑制了枯萎病害發生，但化學藥劑負面影響嚴重，對耕地土壤生態環境破壞極大，長期使用容易導致土壤理化性質發生較大變化，土壤中有益微生物數量顯著減少，土壤自身修復能力降低，而且化學藥劑殘留嚴重，容易污染周邊水源，對農產品及周邊的居民身心健康有著很大的威脅，因此世界各國已經禁用或逐漸禁用部分劇毒農藥如甲基溴等。開發出高效、無毒、綠色的防治方法受到了越來越多的關注。其中，通過采用安全、高效、環境友好型的生物技術手段，利用拮抗微生物來減少黃瓜枯萎病害發生，被認為是一種具有廣闊應用前景的黃瓜枯萎病防治生物技術。該技術通過分離篩選黃瓜枯萎病菌拮抗微生物，制備拮抗微生物菌劑后，施入黃瓜種植土壤中，從而達到抑制黃瓜枯萎病菌生長，防控黃瓜枯萎病發生的目的。但目前可供利用的拮抗微生物種類和數量還相對較少，主要包括木霉屬真菌、非致病尖孢鐮刀菌、淡紫擬青霉、芽孢桿菌等，因此進一步分離篩選黃瓜枯萎病菌拮抗微生物對于黃瓜枯萎病的防治有著重要的意義。?

發明內容

本發明第一目的在于提供一種用于防治黃瓜枯萎病的泡盛曲霉及其微生物菌劑。?

本發明第二目的在于提供上述微生物菌劑的制備方法。?

本發明第三目的在于提供上述泡盛曲霉菌株及其微生物菌劑在防治黃瓜枯萎病上的應用。?

上述泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17菌株，于2013?年1?月11日保藏在位于北京市朝陽區北辰西路1?號院3?號的中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號：CGMCC?No.7127。?

菌株生理特征：上述泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17在PDA培養基上，在28℃培養4天長滿整個9cm培養皿，平坦，質地粉粒狀，表面暗褐色，菌落反面呈橙黃色。分生孢子頭幼時多呈輻射形；老時疏松或裂成疏松的圓粒狀結構；頂囊球形或近球形，淡褐色；分生孢子球形或近球形。?

菌株的鑒定：通過提取上述泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17菌株的基因組，并用18S通用引物對該菌株進行測定，測定的序列表如SEQ?ID?NO.1?所示，從18S?rDNA基因序列測定結果來看上述菌株可以歸為泡盛曲霉。?

利用上述泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17所制備的微生物菌劑為固體菌劑，由泡盛曲霉株和固體培養基組成；其活性成分為泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17菌體和它的胞外代謝產物。?

上述微生物菌劑，其內含有的泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17?的活菌數大于1.0×?10⁸?cfu/g。?

上述微生物菌劑的制備方法，包括以下步驟：?

（1）菌株活化培養：將分離的泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17菌株斜面保藏物接種到PDA斜面，置于28℃培養箱中培養4天，然后作為接種物接種PDA平板，接種后將PDA平板置于28℃培養箱中培養4-7天，直至菌絲體上形成孢子；

（2）???制備固體培養基：以麩皮為原料，調節含水率為40%-50%，121℃高壓滅菌20min，

將冷卻后的麩皮作為泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17的固體培養基；

（3）???制備固體微生物菌劑：將PDA平板上的泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17

孢子及菌絲體用無菌水洗滌后作為接種液接種到固體培養基上，于28℃培養7天進行充分的發酵產孢，即得微生物菌劑。

制備上述泡盛曲霉（Aspergillus?awamori)2-17及其微生物菌劑所使用PDA平板和PDA斜面均為常規操作方法制備。?