[發明專利]檢測豬唾液中偽狂犬病毒gB蛋白特異性抗體的方法

有效

• 申請號: 201410147289.X
• 申請日: 2014-04-14
• 公開（公告）號: CN103995125B
• 公開（公告）日: 2017-01-04
• 發明（設計）人: 李龍;章葉恩;曹洋洋
• 申請（專利權）人: 杭州貝爾塔生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/535
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司33200
• 代理人: 張法高

1.一種檢測豬唾液中偽狂犬病毒gB蛋白特異性抗體的方法，其特征在于包括如下步驟：

1）利用懸掛棉繩法，誘導動物咀嚼，采集唾液，處理后獲得唾液一抗；

2）將唾液一抗，以PBST溶液1:2稀釋后，按編號加入偽狂犬病毒gB抗原包被的96孔聚苯乙烯反應板的反應孔中，每個反應孔加150ul，37℃飽和濕度反應1小時,?以PBST洗滌3次；

3）將辣根過氧化物酶標記的羊抗豬IgG-FC抗體，以?PBST溶液1:1500稀釋后，按順序加入到96孔聚苯乙烯反應板的反應孔中，每個反應孔加100ul，37℃飽和濕度避光反應30分鐘，以PBST洗滌3次；

4）將5%的二甲氧聯苯胺顯色劑，按順序加入到96孔聚苯乙烯反應板的反應孔中，每個反應孔加50ul，避光反應15分鐘，隨后每個反應孔加入50ul?2M濃硫酸；

5）放入酶標儀中，讀取OD405數據，判定結果。

2.?根據權利要求1所述的一種檢測豬唾液中偽狂犬病毒gB蛋白特異性抗體的方法，其特征在于，所述的步驟1）為：以6股、直徑3mm、長1m的全棉繩索懸掛于豬群中間或圍欄上，底端高度與動物肩部齊平，并將繩索的懸掛端解松，待豬群撕咬30min后，回收繩索，并置于無菌的樣品收集袋中，用雙手放在樣品袋外擠出浸潤在繩索上的唾液，并收集與無菌的50ml離心管中，以3000g離心15min，取上清，獲得唾液一抗，保存備用。

3.?根據權利要求1所述的一種檢測豬唾液中偽狂犬病毒gB蛋白特異性抗體的方法，其特征在于，所述的步驟5）為：將終止后的96孔聚苯乙烯反應板，放入預熱的酶標儀中，讀取各反應孔的OD405數值，并根據以下公式判定結果：S/P值=(樣品OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)，S/P值≥0.2，判為陽性，對應群體陽性率≥80%；S/P值＜0.2，判為陽性，對應群體陽性率＜80%。