[發明專利]一種提高全細胞轉化生產α?酮戊二酸產量的方法

有效

• 申請號: 201410146961.3
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103937842B
• 公開（公告）日: 2017-01-18
• 發明（設計）人: 陳堅;劉龍;堵國成;李江華;嘎子侯賽因;侯穎
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12P7/50
• 分類號: C12P7/50;C12N15/53;C12N15/70;C12R1/125
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 何自剛,王玉松

1.一種提高全細胞轉化生產α-酮戊二酸產量的方法，其特征在于以重組枯草芽孢桿菌為生產菌株，敲除其基因組中sucA基因。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述重組枯草芽孢桿菌為表達改造后L-氨基酸脫氨酶基因的枯草芽孢桿菌168。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于所述改造后L-氨基酸脫氨酶基因核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，編碼的突變體為F110I/A255T/E31D/R228C/L249S/I351T。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于敲除重組枯草芽孢桿菌中sucA基因的方法為：通過PCR方法將sucA基因上下游約1000bp及抗性標記片段約1000bp融合，抗性標記片段兩端含有突變的loxP位點；將此融合產物轉化枯草感受態細胞，抗生素篩選發生同源重組的菌株；最后用溫敏型質粒消去抗性，實現無痕敲除。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于敲除sucA基因后此全細胞催化劑轉化L-谷氨酸生產α-酮戊二酸的產量為12.20g/L。