[發明專利]兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法及其品系的建立方法、三倍體魚的選育方法

有效

• 申請號: 201410146126.X
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN103875574A
• 公開（公告）日: 2014-06-25
• 發明（設計）人: 劉少軍;覃欽博;劉筠;羅凱坤;張純;陶敏;肖軍
• 申請（專利權）人: 湖南師范大學
• 主分類號: A01K61/00
• 分類號: A01K61/00
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 謝德珍

技術領域

本發明涉及一種魚類選育及魚類品系的建立方法，尤其涉及一種由異源四倍體鯽魴選育出兩性可育的同源四倍體魚的方法。

背景技術

紅鯽在生物學上屬于鯉形目、鯉科、鯽屬(Cyprinus)；鯽魚營養價值高，蛋白質含量豐富，一直是消費者所喜愛的使用魚類。三倍體魚的不育特征，使其在生長速度、抗逆性、抗病性以及肉質等方面表現出顯著優勢。而建立遺傳穩定的四倍體魚品系可與二倍體魚倍間雜交大規模制備100%的不育三倍體魚。

遠緣雜交（即親緣關系在種間或種間以上的雜交），是一種重要的魚類遺傳育種和性狀改良方法，它可以整合整套外源基因，從而改變雜交后代的遺傳組成和倍性水平，甚至能建立遺傳穩定的四倍體魚群體。如紅鯽與湘江野鯉的屬間遠緣雜交建立了遺傳穩定的四倍體鯽鯉群體。在魚類遺傳育種中，通常可以利用冷/熱休克等方法抑制受精卵的第一次有絲分裂制備出同源四倍體魚，但因育性不穩定而未能形成四倍體魚品系。因此，如何利用和改進現有的育種方法來制備兩性可育同源四倍體魚就成為本領域技術人員長期面臨和需要解決的問題。

發明內容

本發明要解決的技術問題是克服現有技術的不足，提供一種性狀優良、遺傳穩定、受精率和孵化率高的兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法，還提供一種所獲同源四倍體鯽魚品系建立的方法以及相應的三倍體魚的選育方法。

為解決上述技術問題，本發明提出的技術方案為一種兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法，包括以下步驟：在以紅鯽為母本、團頭魴為父本的鯽魴雜交F₁代中挑選出異源四倍體鯽魴，對其進行飼養；待繁殖季節，在異源四倍體鯽魴群體中，挑選能產生不同大小卵子的雌性個體以及能產生水狀精液的雄性個體分別作為母本親魚和父本親魚進行人工催產，再進行人工干法授精，將受精卵置于培養皿中進行流水孵化，再對孵化出的魚苗進行飼養，在飼養后的異源四倍體鯽魴自交后代中進行染色體數目檢測，最終挑選出染色體數目為200的兩性可育同源四倍體鯽魚。

上述的兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法，優選的，從所述鯽魴雜交F₁代中挑選出異源四倍體鯽魴的方法主要是利用流式細胞測定鯽魴雜交F₁代DNA含量、利用腎細胞染色體制備工藝檢測鯽魴雜交F₁代染色體倍性，進而挑選出異源四倍體鯽魴；對挑選出的異源四倍體鯽魴進行飼養時，養殖數量在3000尾以上，且雌、雄比例控制為1∶3～1∶5。

上述的兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法，優選的，在所述異源四倍體鯽魴群體中挑選母本親魚和父本親魚時，均選取兩齡以上、無病態、發育良好、性成熟特征明顯的F₁代異源四倍體鯽魴；所述母本親魚和父本親魚在進行人工催產前，先放入親魚池內人工精養3～4個月。

上述的兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法，優選的，所述挑選母本親魚的方法具體包括：挑選腹部膨大、輕壓腹部能擠出墨綠色卵子的雌性個體，取該雌性個體的少量卵子放入盛有水的培養皿中觀察，根據觀察結果挑選出能產生不同大小卵子的雌性個體；

所述挑選父本親魚的方法具體包括：利用普通光學顯微鏡對能擠出水樣精液的雄性個體的精液進行鏡檢，選擇精液中有活精子的雄性個體作為父本親魚。

我們通過反復研究后發現，同源四倍體鯽魴里面有兩種生殖形式，一種是正常減數分裂，此時卵子大小一致，都是含有一套紅鯽和一套團頭魴的異源配子，這樣無法通過雜交獲得同源四倍體；但是另有一部分個體能產生大小不同的卵子，我們的研究表明大小不同的卵子是由于減數分裂異常造成的，更重要的是這種異常染色體行為使得20%～30%的卵子是含有兩套紅鯽染色體的同源卵子。因此，在異源四倍體鯽魴自交后代中可以穩定獲得一定比例的同源四倍體鯽魚。

上述的兩性可育同源四倍體鯽魚的選育方法，優選的，所述人工催產的具體操作步驟包括：在4月初至5月下旬，水溫維持在20℃～26℃，然后對母本親魚先注射絨毛膜促性腺激素（HCG）與黃體素釋放激素類似物（LRH-A）的混合液催產，其中絨毛膜促性腺激素的用量為600IU/kg～800IU/kg，黃體素釋放激素類似物的用量為10μg/kg～20μg/kg；再對父本親魚注射絨毛膜促性腺激素與黃體素釋放激素類似物的混合液，相比母本親魚，其注射劑量減半；然后按1∶（5～10）的數量比將注射后的母本親魚、父本親魚放入同一產卵池中（水面面積為80m²左右），再向產卵池中沖水（視水情及時向池中沖水，尤其在產卵前3h～4h），之后停止沖水并讓母本親魚和父本親魚在靜水中催產，直至其開始順利產卵和產精。