[發明專利]一種脫細胞基質修復凝膠及其制備新方法

有效

• 申請號: 201410145791.7
• 申請日: 2014-04-11
• 公開（公告）號: CN104971380B
• 公開（公告）日: 2017-12-15
• 發明（設計）人: 高秀巖;任孝敏;姜紅;紀萍;敖強;叢立波
• 申請（專利權）人: 山東雋秀生物科技股份有限公司
• 主分類號: A61K9/06
• 分類號: A61K9/06;A61L27/36;A61L27/52
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種制備脫細胞基質修復凝膠的方法，具體步驟如下：

1）預處理：用PBS緩沖液清洗除去新鮮動物組織器官上的血跡和污垢；

2）病毒滅活：將前一步驟預處理后的動物組織器官用病毒滅活試劑浸泡進行病毒滅活，所述病毒滅活試劑為過氧乙酸水溶液；

3）剪碎：將前一步驟病毒滅活處理后的動物組織器官剪碎；

4）脫除細胞膜脂質成分：用含去垢劑的PBS緩沖溶液脫除細胞膜脂質成分，脫除處理后采用PBS緩沖液清洗；

5）脫細胞：用含胰蛋白酶和EDTA的PBS緩沖溶液脫除細胞，脫除處理后采用PBS緩沖液清洗；

6）核酸酶處理：用含核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶的PBS混合溶液脫除殘留的細胞核成分，酶脫除反應結束后采用PBS緩沖液清洗，得到組織脫細胞基質；

7）消化：將前一步驟的組織脫細胞基質置于消化液中振蕩進行消化處理，所述消化液為蛋白酶溶液；

8）恒溫孵育：消化反應結束后加入PBS緩沖液進行恒溫孵育，即可得到脫細胞基質凝膠。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟1）所述動物組織器官來源于哺乳動物的組織器官。

3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述哺乳動物選自人、豬、牛、羊和兔；所述組織器官選自皮膚、腦膜、膈膜、羊膜、心包膜、心臟瓣膜、小腸粘膜下層、肌肉、血管、肌腱、韌帶、軟骨、食道、胃、神經和膀胱。

4.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟2）所述病毒滅活試劑為質量濃度0.1%～1%的過氧乙酸水溶液。

5.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟4）所述的含去垢劑的PBS緩沖溶液，去垢劑的濃度為0.1～2wt%；去垢劑的種類選自曲拉通X-100、脫氧膽酸鈉、平平加，以及十二烷基磺酸鈉中的任一種。

6.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟5）所述的含胰蛋白酶和EDTA的PBS緩沖溶液，胰蛋白酶的濃度為0.1～1wt%，EDTA的濃度為0.1～1wt%。

7.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟6）所述的含核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶的PBS混合溶液，核糖核酸酶的濃度為5～50μ g/ml，脫氧核糖核酸酶的濃度為50～500μg/ml。

8.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟7）所述消化液為0.1～0.5wt%的蛋白酶溶液，所述蛋白酶的種類選自胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶，以及組織蛋白酶中的任一種。

9.一種脫細胞基質修復凝膠，采用權利要求1-8任一權利要求所述方法制備獲得。

10.權利要求1-8任一權利要求所述制備方法，以及權利要求9所述脫細胞基質修復凝膠在制備組織損傷修復制劑中的應用。